Anticorpo policlonal de coelho anti-NLRP3 para WB, IF/ICC, ELISA - Q8R4B8

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do NLRP3

• O NLRP3 (proteína 3 contendo domínios NACHT, LRR e PYD, também conhecida como criopirina) é um sensor intracelular que forma o componente central do inflamassoma NLRP3, mediando a ativação em resposta a defeitos na integridade da membrana, o que leva à secreção de IL1B e IL18 e à piroptose. Referências relacionadas: PMID:19362020, PMID:23582325, PMID:26642356

• O NLRP3 inicia a formação de um complexo inflamassoma polimérico com CASP1 e PYCARD/ASC, que ativa a caspase-1 para clivar pro-IL1B, pro-IL18 e gasdermina-D (GSDMD), resultando na liberação de citocinas e na morte celular piroptótica. Referências relacionadas: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:19362020, PMID:16546100, PMID:17008311, PMID:26642356

• Diversos estímulos associados a patógenos e danos, incluindo ATP extracelular, nigericina, cristais (urato, colesterol), beta-amiloide e partículas (amianto, sílica), desencadeiam a ativação do NLRP3, convergindo quase todos para o efluxo intracelular de K+. Referências relacionadas: PMID:16407888, PMID:16407889, PMID:16407890, PMID:23809161

• A ativação do inflamassoma NLRP3 também é necessária para a secreção de HMGB1 e controla uma resposta homeostática de cicatrização de feridas que direciona a migração de neutrófilos para locais necróticos sem danificar tecidos saudáveis. Referências relacionadas: PMID:22801494, PMID:20947763

• Após a ativação, o NLRP3 é transportado para o centro organizador de microtúbulos (MTOC) e, em seguida, para vesículas dispersas da rede trans-Golgi (dTGN), onde se liga ao fosfatidilinositol 4-fosfato (PtdIns4P) e monta inflamassomas ativos, um processo liberado pela NEK7. Referências relacionadas: PMID:26814970, PMID:34615873, PMID:34861190, PMID:30487600

• O NLRP3 é altamente expresso em leucócitos do sangue periférico (linfócitos Th2 e macrófagos) e em baixos níveis nos osteoblastos, em consonância com suas funções imunológicas e inflamatórias. Referências relacionadas: PMID:15302403, PMID:16546100, PMID:26098997, PMID:28847925, PMID:17907925

• Independentemente de sua função como estrutura do inflamassoma, o NLRP3 atua como regulador transcricional nas células Th2, ligando-se ao DNA e modulando a expressão de IL4, IL5, IL13 e outros genes essenciais para a diferenciação Th2 e a inflamação alérgica. Referências relacionadas: PMID:26098997

• O NLRP3 possui atividade ATPase intrínseca e é regulado por várias modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, palmitoilação e ubiquitinação, que controlam seu limiar de ativação e suas interações. Referências relacionadas: PMID:34861190

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 1–93 do NLRP3 de camundongo, uma região que contém o domínio pirina (PYD). Considere que o anticorpo pode detectar tanto a proteína de comprimento completo quanto fragmentos que contêm PYD; valide a especificidade no seu sistema modelo.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de aproximadamente 118 kDa; contudo, modificações pós-traducionais podem resultar em bandas adicionais. Utilize controles positivos e negativos apropriados, como lisados de macrófagos estimulados com LPS+ATP, e otimize as porcentagens do gel para proteínas de alto peso molecular.
• Na imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), o NLRP3 pode apresentar marcação pontilhada ou difusa, dependendo do estado de ativação. As condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas para preservar sua localização nativa.
• Para aplicações de ELISA, pode ser necessário combinar este anticorpo com outro anticorpo específico para NLRP3 em formatos de sanduíche; a natureza policlonal pode ser vantajosa para captura ou detecção.

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