pAb de coelho contra OGT para WB - O15294

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da OGT

• A OGT (subunidade de 110 kDa da UDP-N-acetilglucosamina--peptídeo N-acetilglucosaminiltransferase) é a subunidade catalítica que transfere uma única N-acetilglucosamina (GlcNAc) da UDP-GlcNAc para resíduos de serina ou treonina das proteínas-alvo, formando uma modificação O-GlcNAc ligada em beta, que compete com a fosforilação e regula a função, a estabilidade e as interações das proteínas. Referências relacionadas: PMID:12150998, PMID:15361863, PMID:19451179
• Ela glicosila uma ampla variedade de substratos citoplasmáticos e nucleares — incluindo histonas, quinases e fatores de transcrição — influenciando, assim, a sinalização da insulina, a glicólise, a remodelação da cromatina e os ritmos circadianos. Referências relacionadas: PMID:19451179, PMID:20200153, PMID:21285374
• No núcleo, a OGT é recrutada para locais de início da transcrição ricos em CpG por meio das proteínas TET, para realizar a O-GlcNAcilação da histona H2B na Ser‑112, impactando diretamente a arquitetura da cromatina e a expressão gênica. Referências relacionadas: PMID:22121020, PMID:23353889
• A OGT estabiliza a EZH2 por meio da O-GlcNAcilação na Ser‑75, o que promove a deposição de H3K27me3 pelo complexo PRC2 e reforça o silenciamento epigenético. Referências relacionadas: PMID:24474760
• A O-GlcNAcilação de RPTOR e FNIP1 pela OGT conecta o estado nutricional à ativação de mTORC1, posicionando a OGT como um sensor metabólico crítico. Referências relacionadas: PMID:30699359, PMID:37541260
• Além de suas funções citoplasmáticas e nucleares, uma isoforma direcionada às mitocôndrias (mOGT) induz apoptose, e a atividade da OGT modula a autofagia por meio da glicosilação de ATG4B. Referências relacionadas: PMID:27527864
• A OGT é altamente expressa no pâncreas, com níveis mais baixos no músculo esquelético, coração, cérebro e placenta; ela circula entre o núcleo, o citoplasma, as mitocôndrias e os compartimentos de membrana, refletindo suas funções pleiotrópicas. Mutações na OGT estão associadas à deficiência intelectual ligada ao cromossomo X (MRX106, XLID106).

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 510–699 da OGT humana (NP_858058.1), abrangendo parte do domínio catalítico C-terminal e das repetições TPR; esse desenho tem como alvo uma região conservada entre humanos, camundongos e ratos, sustentando a reatividade cruzada descrita.
• Para western blot (WB), espera-se uma banda predominante em aproximadamente 117 kDa; bandas adicionais podem aparecer devido a proteoformas O-GlcNAciladas ou à isoforma mitocondrial de 78 kDa relatada. Valide utilizando controles positivos apropriados.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P) e na imunofluorescência (IF/ICC), considere as etapas de recuperação antigênica e confirme os padrões de distribuição subcelular (núcleo, citoplasma, mitocôndrias) em comparação com dados de localização conhecidos.
• O uso em ELISA pode exigir a otimização do antígeno de revestimento e do sistema de detecção; o anticorpo pode ser combinado com reagentes secundários anti-coelho apropriados.
• Como se trata de um anticorpo policlonal, a consistência entre lotes deve ser monitorada em aplicações críticas; realize uma qualificação interna ao mudar de lote ou de formato de ensaio.

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