Anticorpo Monoclonal Coelho PAK1 para WB, IF/ICC, ELISA - Q13153

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PAK1

• Codificado pelo gene PAK1, o PAK1 (quinase 1 ativada por p21) é uma serina/treonina-proteína quinase também conhecida como alfa-PAK, p65-PAK e PAKalfa. Pertence à família de quinases PAK que atuam como efetores para as pequenas GTPases CDC42 e RAC1.
• O PAK1 serve como um nó crítico de sinalização a jusante de integrinas e receptores tirosina quinase, regulando diversos processos celulares, incluindo dinâmica do citoesqueleto, adesão celular, migração, proliferação, apoptose, mitose e transporte mediado por vesículas (PubMed:10551809, PubMed:11896197, PubMed:12876277). Referências relacionadas: PMID:10551809 PMID:11896197 PMID:12876277
• Após ativação por CDC42 e RAC1 ligados a GTP, o PAK1 conecta as GTPases da família Rho à via da quinase MAP JNK e fosforila alvos a jusante, como MAP2K1, RAF1 e LIMK1, influenciando assim a expressão gênica e a remodelação da actina (PubMed:8805275, PubMed:9528787, PubMed:11733498, PubMed:23633677). Referências relacionadas: PMID:8805275 PMID:9528787 PMID:11733498 PMID:23633677
• O PAK1 localiza-se em múltiplos compartimentos subcelulares, incluindo citoplasma, adesões focais, lamelaipódios, dobras de membrana, invadopódios, nucleoplasma e centrossomos, consistente com seus papéis pleiotrópicos na motilidade celular, adesão e sinalização nuclear.
• A quinase desempenha um papel na reorganização do citoesqueleto de actina e dos complexos de adesão focal, fosforilando diretamente reguladores como a cadeia leve da miosina e a coffilina para modular a contratilidade actomiosina e a forma celular (PubMed:9032240, PubMed:9395435). Referências relacionadas: PMID:9032240 PMID:9395435
• Nos neurônios, o PAK1 é essencial para a formação de espinhas dendríticas, o desenvolvimento de sinapses excitatórias e a transmissão inibitória GABAérgica, em parte através da estabilização de F-actina e da fosforilação da cadeia leve regulatória da miosina II.
• O PAK1 tem sido implicado no câncer: está superexpresso em células e tecidos de câncer gástrico (PubMed:25766321), promove migração e invasão celular, e fosforila substratos envolvidos na remodelação da cromatina (MORC2, PubMed:23260667) e na transição epitélio-mesenquimal (SNAI1, PubMed:15833848). Referências relacionadas: PMID:25766321 PMID:23260667 PMID:15833848
• Além disso, o PAK1 participa na secreção de insulina (PubMed:22669945), na resposta a danos no DNA e na dinâmica dos grânulos de estresse (PubMed:20417602). Referências relacionadas: PMID:22669945 PMID:20417602

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético abrangendo os aminoácidos 1-100 do PAK1 humano, que corresponde à região N-terminal. É provável que esta região seja conservada entre humano, camundongo e rato, consistente com a reatividade cruzada relatada.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto do PAK1 é de aproximadamente 61 kDa; no entanto, modificações pós-traducionais ou variantes de splicing podem resultar em bandas adicionais. Use condições redutoras apropriadas e valide com controles positivos conhecidos (por exemplo, lisados de células HeLa ou MCF-7).
• Na imunofluorescência (IF/ICC), o PAK1 exibe distribuição subcelular dinâmica, aparecendo em adesões focais, dobras de membrana e núcleo, dependendo do tipo celular e estímulo. A fixação com paraformaldeído e a permeabilização com Triton X-100 ou metanol podem ser adequadas, mas a otimização é recomendada para sua linhagem celular e condições específicas.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado em formatos diretos ou indiretos. Considere usar o peptídeo imunogênico como controle positivo para estabelecer a sensibilidade e especificidade do ensaio.
• Este anticorpo não foi testado em outras aplicações; se usado para IP, ChIP ou bloqueio funcional, é aconselhada uma validação completa no sistema de amostra relevante.

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