Anticorpo Monoclonal de Coelho Pan-Akt para Western Blot, IP, IF, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Pan-Akt

• A AKT1 é uma das três quinases serina/treonina intimamente relacionadas (AKT1/PKBα, AKT2/PKBβ, AKT3/PKBγ) que compartilham alta similaridade estrutural e especificidades de substrato sobrepostas, regulando coletivamente processos celulares críticos.
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• Atuando a jusante da PI3K, a AKT medeia a sinalização de insulina e fatores de crescimento (IGF1, EGF, PDGF) para controlar o metabolismo, crescimento celular, proliferação, sobrevivência e angiogênese.
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• A AKT promove a sobrevivência celular ao fosforilar diretamente e inativar fatores pró-apoptóticos, incluindo MAP3K5/ASK1 (Ser83) e BAD, e ao ativar fatores de transcrição como CREB1 e NF-κB.
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• Através da fosforilação de TSC2 e DEPDC5/CASTOR1, a AKT estimula a atividade do mTORC1, promovendo a síntese proteica e inibindo a autofagia.
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• A AKT fosforila FOXO1, FOXO3 e FOXO4, desencadeando sua ligação a proteínas 14-3-3 e retenção citoplasmática, suprimindo assim a transcrição de genes pró-apoptóticos.
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• A proteína localiza-se no citoplasma, núcleo, membrana celular e espaço intermembranar mitocondrial, facilitando a sinalização dependente do contexto; é expressa ubiquamente e frequentemente superativada em cânceres como carcinoma de próstata e mama.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O peso molecular esperado para o Pan-Akt é de aproximadamente 56 kDa; uma única banda ou múltiplas bandas correspondentes a diferentes isoformas podem ser observadas dependendo da linhagem celular e das condições de tratamento.
• Para Western blotting (WB), considere começar com uma diluição de 1:1000 e otimizar com base na abundância do alvo em sua amostra.
• Para imunoprecipitação (IP), use 2-5 µg de anticorpo por 500 µg de lisado proteico total; valide com controles positivos e negativos apropriados.
• Em imunofluorescência (IF/ICC) e imuno-histoquímica (IHC-P), otimize a fixação e permeabilização, e teste diluições entre 1:50 e 1:200.
• Aplicações de ELISA podem exigir o pareamento com um anticorpo de detecção adequado; certifique-se de que o anticorpo reconhece a proteína nativa nas condições do ensaio.
• A reatividade cruzada foi relatada para Akt humano, de camundongo e rato; se usar outras espécies, verifique a homologia de sequência na região do imunógeno (resíduos 1-123 do Akt1 humano).
• O anticorpo reconhece todas as três isoformas da AKT; para estudos isoforma-específicos, confirme a especificidade com controles genéticos ou inibidores específicos.

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