Anticorpo policlonal de coelho anti-PDK4 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q16654

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do PDK4

• O PDK4 é uma quinase mitocondrial que fosforila especificamente as subunidades alfa E1 da piruvato desidrogenase (PDHA1 e PDHA2), levando à inativação do complexo PDH.
• Por meio da regulação da PDH, o PDK4 controla o fluxo de piruvato para o ciclo do ácido tricarboxílico, reduzindo assim a respiração aeróbica e promovendo a utilização de ácidos graxos em vez da oxidação da glicose.
• O PDK4 é essencial para a adaptação metabólica durante o jejum e a inanição: ajuda a manter a homeostase da glicose no sangue, evita a formação excessiva de corpos cetônicos e preserva o pH sanguíneo normal em condições de privação de nutrientes.
• A proteína localiza-se na matriz mitocondrial por meio de um peptídeo de trânsito N-terminal e funciona como uma quinase nucleotídica de ligação ao ATP.
• Embora seja expresso de forma ubíqua, o PDK4 apresenta níveis mais elevados no coração e no músculo esquelético, refletindo sua importância em tecidos com alta demanda metabólica e flexibilidade na utilização de combustíveis.
• Além do controle metabólico, o PDK4 contribui para a geração de espécies reativas de oxigênio, protege células epiteliais desprendidas da anoikis e influencia a proliferação celular ao modular o metabolismo de carboidratos e lipídios.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange uma grande região interna (aa 102–411) do PDK4 humano; o anticorpo policlonal resultante pode reconhecer vários epítopos, aumentando potencialmente a sensibilidade, mas também exigindo controles negativos apropriados.
• Para western blot (WB), espera-se uma banda principal de aproximadamente 46 kDa; valide a especificidade utilizando lisados de tecidos ou células com expressão conhecida de PDK4 (por exemplo, coração e músculo esquelético) ou realizando knockdown com siRNA.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), considere métodos de recuperação antigênica e teste o anticorpo em cortes fixados em formalina e incluídos em parafina de coração ou músculo esquelético; deve ser observada marcação mitocondrial.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), confirme a localização mitocondrial por meio de coloração simultânea com um marcador mitocondrial; as condições de fixação e permeabilização podem exigir otimização.
• A reatividade cruzada foi relatada para humanos, camundongos e ratos; o alinhamento de sequências sugere epítopos conservados, mas os usuários devem verificar o desempenho em seus sistemas-modelo específicos.

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