Anticorpo Monoclonal Coelho PE Anti-Humano NT5E/CD73 para Citometria de Fluxo - P21589

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NT5E/CD73

• O NT5E/CD73, também conhecido como ecto-5'-nucleotidase, é uma proteína de membrana celular ancorada em glicosilfosfatidilinositol (GPI) que catalisa a hidrólise de nucleotídeos monofosfato extracelulares em seus nucleosídeos correspondentes e fosfato inorgânico.
• A enzima exibe preferência pelo AMP como substrato, mas também pode hidrolisar IMP, UMP, GMP, CMP e monofosfatos de desoxirribonucleotídeos, como dAMP, dCMP e dTMP. Referências relacionadas: PMID:21933152, PMID:22997138, PMID:23142347
• O NT5E mostra seletividade por monofosfatos de ribonucleotídeos em relação às formas de desoxirribose. Referências relacionadas: PMID:34403084
• A proteína está localizada na membrana celular, onde regula a sinalização purinérgica convertendo AMP extracelular em adenosina, um potente metabólito imunossupressor.
• O NT5E é um membro da família das 5'-nucleotidases e requer íons de zinco para sua atividade hidrolítica, conforme indicado por domínios de ligação a metais.
• O splicing alternativo do gene NT5E produz múltiplas variantes de transcrito, embora a significância funcional de todas as isoformas não esteja totalmente caracterizada.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação ligada a N, formação de ligações dissulfeto e a adição de uma âncora GPI que prende a enzima à superfície celular.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo monoclonal conjugado a PE é projetado para detecção direta por citometria de fluxo do CD73 na superfície de células humanas vivas. Certifique-se de que as células estejam viáveis para preservar a integridade da membrana e a apresentação ideal do epítopo.
• O imunógeno corresponde ao domínio extracelular (a.a. 27-547), portanto, espera-se que o anticorpo reconheça um epítopo acessível na superfície celular sem a necessidade de permeabilização.
• Para obter os melhores resultados, faça uma titulação do anticorpo para determinar a concentração ideal para seu tipo celular específico e condições de coloração. Normalmente, 0,1–1 µg por 1×10^6 células é uma faixa inicial razoável.
• Inclua controles de isotipo apropriados e controles de compensação ao realizar citometria de fluxo multicolor para contabilizar ligação inespecífica e sobreposição espectral.
• A expressão do CD73 pode ser modulada pela ativação celular; considere validar o anticorpo em amostras em repouso e estimuladas, se relevante para seu estudo.

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