Anticorpo Monoclonal de Coelho anti-RANKL/CD254 Humano conjugado com PE para Citometria de Fluxo (Intracelular) - O14788

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do RANKL/CD254

• TNFSF11, também conhecido como RANKL, OPGL, ODF, TRANCE e CD254, é um membro da superfamília de ligantes do fator de necrose tumoral (TNF) (UniProt: O14788).
• Funciona como uma citocina fundamental ao ligar-se a TNFRSF11A/RANK e TNFRSF11B/OPG, atuando como fator de diferenciação e ativação de osteoclastos. Referências relacionadas: PMID:22664871
• No sistema imunológico, o RANKL aumenta a estimulação, mediada por células dendríticas, da proliferação de células T naive e regula as interações entre células T e células dendríticas (por similaridade).
• Induz a osteoclastogênese por meio da ativação de vias de sinalização que levam à translocação nuclear de NFATC1 e à transcrição de genes específicos de osteoclastos; também induz a ativação de CREB1 e a produção de ROS mitocondriais por meio do eixo TMEM64-ATP2A2 (por similaridade).
• Subcelularmente, o RANKL existe como uma proteína transmembrana na membrana celular, mas também pode ser clivado e secretado, sendo detectado no citoplasma e em formas secretadas.
• A maior expressão é encontrada nos linfonodos periféricos, com expressão mais fraca no baço, leucócitos do sangue periférico, medula óssea, coração, placenta, músculo esquelético, estômago e tireoide.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação, e o splicing alternativo produz múltiplas isoformas, contribuindo para sua diversidade funcional; mutações em TNFSF11 estão associadas à osteopetrose.
• As palavras-chave incluem citocina, membrana, splicing alternativo, proteína do desenvolvimento, glicoproteína, âncora de sinal e hélice transmembrana.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange o domínio extracelular (aa 136-317), que pode reconhecer tanto o RANKL ligado à membrana quanto o RANKL solúvel. Para citometria de fluxo intracelular, garanta uma permeabilização celular adequada e considere incluir controles não estimulados.
• Como se trata de um anticorpo conjugado com PE, proteja-o da luz e evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para manter a intensidade da fluorescência e a integridade do anticorpo.
• Valide o desempenho em modelos celulares relevantes, como células T ativadas, precursores de osteoclastos ou linhagens celulares que expressam RANKL. Titule o anticorpo para determinar a concentração ideal de marcação para o seu sistema específico.
• Se utilizado em combinação com outros fluoróforos, projete cuidadosamente os controles de compensação para evitar artefatos de sobreposição espectral.

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