Anticorpo monoclonal de coelho anti-TIGIT humano conjugado com PE para citometria de fluxo - Q495A1

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do TIGIT

• O TIGIT (imunorreceptor de células T com domínios Ig e ITIM) é um receptor inibitório da superfamília das imunoglobulinas, também conhecido como VSIG9 e VSTM3, que modula as respostas imunes principalmente suprimindo a ativação das células T por meio da promoção de células dendríticas imunorreguladoras maduras. Referências relacionadas: PMID:19011627
• Ele se liga com alta afinidade ao receptor do poliovírus PVR/CD155 e à nectina-2/CD112 presentes nas células apresentadoras de antígeno, transmitindo sinais inibitórios às células T e NK; o envolvimento do ligante desencadeia a fosforilação de sua cauda citoplasmática pelas cinases Src FYN ou LCK, recrutando GRB2 e a fosfatase SHIP1 para atenuar as vias PI3K e MAPK. Referências relacionadas: PMID:23154388
• Além disso, o TIGIT associa-se à β-arrestina-2/ARRB2 para recrutar SHIP1, que suprime a auto-ubiquitinação de TRAF6 e, consequentemente, inibe a cascata de sinalização de NF-κB. Referências relacionadas: PMID:24817116
• Ele também atua como receptor funcional da nectina-4 para inibir a citotoxicidade das células NK, ampliando seu repertório de pontos de controle imunológico. Referências relacionadas: PMID:32503945
• No nível proteico, o TIGIT é expresso em baixos níveis nas células T CD4+ de memória periférica e reguladoras, bem como nas células NK, e é acentuadamente suprarregulado após a ativação dessas células.
• Subcelularmente, ele se localiza na membrana celular como uma proteína transmembrana do tipo I de passagem única.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação, formação de pontes dissulfeto e fosforilação, essenciais para suas funções de sinalização.
• O splicing alternativo gera isoformas do receptor, e a proteína é membro do proteoma de referência, com massa molecular calculada de aproximadamente 26,3 kDa.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Este anticorpo monoclonal de coelho conjugado com PE foi desenvolvido para a detecção direta de TIGIT humano em células vivas por citometria de fluxo (FC); não é necessária coloração secundária.
• Considerando que o imunógeno recombinante abrange o domínio extracelular (aminoácidos 22–141), é provável que o anticorpo reconheça um epítopo localizado na região de ligação ao ligante; considere realizar experimentos de bloqueio com PVR/CD155 ou nectina-2 para confirmar a especificidade.
• Como a expressão de TIGIT é baixa em células em repouso e aumenta após a ativação, inclua uma etapa de ativação apropriada (por exemplo, estimulação anti-CD3/CD28 para células T ou IL-2 para células NK) para maximizar o sinal.
• Titule o anticorpo para determinar a concentração de trabalho ideal para seu tipo celular específico e suas condições de ensaio, incluindo sempre controles de isotipo apropriados.

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