Anticorpo Monoclonal de Coelho PE anti-Fosfo-Zap70-Y319+Syk-Y352 Humano/Camundongo para Citometria de Fluxo Intracelular - P43403

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ZAP70

• A ZAP70 é uma tirosina quinase de 70 kDa essencial para a imunidade adaptativa, desempenhando um papel central na sinalização do receptor de células T (TCR) ao fosforilar as proteínas adaptadoras LAT e LCP2 após ativação.
• Após o engajamento do TCR, a ZAP70 é recrutada para os motivos ITAM fosforilados de CD3E e CD247/CD3Z na membrana plasmática, um processo que alivia sua autoinibição e requer fosforilação mediada por LCK (PubMed:7509083).
  Referências relacionadas: PMID:7509083
• A ZAP70 regula ainda a dinâmica de ativação das células T controlando a reorganização do citoesqueleto, a adesão e a mobilidade, garantindo a entrega adequada de efetores às células apresentadoras de antígeno.
• Ela também está envolvida na regulação negativa do TCR, mediando a internalização e degradação de CD247/CD3Z através da interação com a ubiquitina ligase CBL e as adaptadoras SLA/SLA2, modulando assim o término do sinal.
• A ZAP70 é expressa em células T, células natural killer, timócitos precoces e células pro/pré-B, e contribui tanto para o desenvolvimento quanto para a ativação de células T e B.
• A proteína contém dois domínios SH2 que se ligam especificamente a ITAMs fosforilados, um domínio quinase de ligação a ATP, e sofre modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e ubiquitinação, conforme destacado pelas palavras-chave do UniProt, como "Fosfoproteína", "Conjugação Ubl", "Ligação Isopeptídica" e "Acetilação".
• O splicing alternativo produz múltiplas isoformas da ZAP70, e variantes associadas a doenças estão ligadas à imunodeficiência combinada grave (SCID) devido ao comprometimento da sinalização do TCR.
• O sítio do imunógeno (Y319) é um sítio de fosforilação regulatório chave na região do domínio B interdomínio, altamente conservado entre humano e camundongo, e sua fosforilação é crítica para a ativação da ZAP70; o anticorpo também pode apresentar reatividade cruzada com a Syk em seu sítio análogo Y352 devido à homologia de sequência no loop de ativação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Devido à natureza fosfo-específica deste anticorpo, inclua inibidores de fosfatase em todos os tampões de lise, fixação e coloração para manter os níveis de fosforilação durante o processamento da amostra.
• Valide a especificidade do anticorpo comparando os sinais em células estimuladas vs. não estimuladas, ou tratando as amostras com fosfatase lambda antes da coloração.
• O anticorpo é validado para citometria de fluxo intracelular (CF intra); garanta protocolos otimizados de fixação e permeabilização (por exemplo, usando permeabilização à base de metanol ou saponina) para obter os melhores resultados.
• Para estudos de sinalização em células T, considere usar controles positivos conhecidos, como células Jurkat estimuladas com anti-CD3/CD28 ou PBMCs humanas primárias, e controles negativos, como células T em repouso ou células B deficientes em Syk, se estiver avaliando a reatividade cruzada.

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