Anticorpo monoclonal de coelho anti-CD25 de rato conjugado com PE para citometria de fluxo - P26897

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do CD25 (subunidade alfa do receptor da interleucina-2)

• O CD25, também conhecido como subunidade alfa do receptor da interleucina-2, IL-2Rα ou antígeno TAC, é uma proteína de membrana do tipo I codificada pelo gene Il2ra em ratos (UniProt P26897).
• Ele atua como a subunidade alfa do receptor de alta afinidade da interleucina-2 (IL-2). Juntamente com as subunidades beta (CD122) e gama (CD132), liga-se à IL-2 e medeia a sinalização essencial para a homeostase imunológica.
• O receptor desempenha um papel fundamental na tolerância imunológica ao controlar a atividade das células T reguladoras (TREGs), que suprimem a ativação e a expansão das células T autorreativas.
• O CD25 é constitutivamente expresso em níveis elevados nas células T reguladoras CD4+Foxp3+ e é transitoriamente aumentado nas células T efetoras ativadas, tornando-se um marcador importante para estudos imunológicos.
• A região extracelular contém dois domínios Sushi (CCP/SCR), característicos das proteínas de controle do complemento e envolvidos na ligação ao ligante.
• As principais características estruturais incluem um peptídeo-sinal N-terminal, múltiplas repetições Sushi, uma única hélice transmembrana e uma cauda citoplasmática curta. A proteína é modificada por glicosilação ligada a N e contém ligações dissulfeto intramoleculares.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno deste anticorpo monoclonal compreende os aminoácidos 22-235 do CD25 de rato, correspondendo ao domínio extracelular completo. Esse desenho tem como alvo a região nativa e distal da membrana, acessível em células intactas.
• Como anticorpo conjugado com PE, ele se destina principalmente à citometria de fluxo. Recomendamos uma titulação inicial utilizando um modelo celular relevante (por exemplo, esplenócitos de rato ativados ou linhagens de células T) para identificar a concentração ideal de marcação.
• Utilize um controle de isotipo apropriado para distinguir a marcação positiva do fundo. Recomenda-se o bloqueio adequado dos receptores Fc ao marcar células com alta expressão de FcγR.
• Como a expressão de CD25 pode ser sensível à fixação e à permeabilização, valide o protocolo de preparação das amostras para preservar os epítopos de superfície ao avaliar marcadores da superfície celular.
• Para a detecção intracelular de CD25, é essencial otimizar as etapas de permeabilização, pois o impedimento estérico pode alterar a acessibilidade do anticorpo.

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