Anticorpo monoclonal de rato anti-CD45R/B220 de camundongo conjugado a PE para citometria de fluxo - P06800 / P08575

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de CD45R/B220

• CD45R/B220, codificado pelo gene Ptprc, é uma proteína tirosina-fosfatase do tipo receptor (PTPase), também conhecida como antígeno leucocitário comum (L-CA) e antígeno linfocitário 5 (Ly-5). É predominantemente expresso em células hematopoiéticas, incluindo linfócitos B e T, e existe em múltiplas isoformas geradas por splicing alternativo.
• A proteína atua como um regulador crítico da sinalização do receptor de células T, modulando a atividade de quinases da família Src, como LYN e FYN. Ela desfosforila LYN, influenciando cascatas de sinalização a jusante essenciais para a ativação e a coativação de células T após a ligação à DPP4.
• Nas sinapses imunológicas entre células apresentadoras de antígeno (APC) e células T, CD45 interage com CLEC10A em células dendríticas imaturas, que reconhece CD45 portador do antígeno Tn em células T efetoras. Essa interação ajuda a ajustar os limiares de ativação das células T e a limitar respostas autorreativas (por similaridade).
• CD45 contém dois domínios intracelulares de fosfatase: o primeiro apresenta atividade catalítica, enquanto o segundo parece regular a especificidade pelo substrato. A região extracelular é intensamente glicosilada e contribui para as interações com ligantes e para funções específicas das isoformas.
• A proteína localiza-se principalmente na membrana plasmática e está enriquecida em jangadas de membrana e sinapses imunológicas, onde organiza espacialmente os complexos de sinalização após o reconhecimento do antígeno.
• Como uma glicoproteína transmembrana e membro da família das proteínas fosfatases, CD45 é um marcador bem estabelecido de linhagens de células imunes. A isoforma B220 está especificamente associada às células B e é amplamente utilizada para identificar populações de células B em modelos de camundongo.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação e glicosilação, modulam a atividade enzimática e a expressão na superfície celular de CD45, influenciando assim a dinâmica da sinalização das células imunes.
• Embora seja estudado principalmente em células linfoides, CD45 também desempenha funções em outros subconjuntos de leucócitos, contribuindo para respostas imunes inatas e adaptativas integradas.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético derivado de uma região conservada de CD45R/B220 de camundongo/humano. Espera-se que o anticorpo resultante reconheça CD45R/B220 de camundongo; a reatividade cruzada com ortólogos humanos deve ser validada experimentalmente, se necessário.
• Este anticorpo é conjugado a PE (ficoeritrina), um fluoróforo brilhante adequado para painéis de citometria de fluxo multiparamétrica. Considere titular o anticorpo para otimizar as relações sinal-ruído e minimizar a ligação inespecífica no seu sistema celular específico.
• Para aplicações de citometria de fluxo, utilize corantes de viabilidade apropriados e reagentes bloqueadores de receptores Fc para reduzir a coloração de fundo. Analise tecidos linfoides de camundongo frescos ou devidamente criopreservados (baço, linfonodos) para detectar populações de células B positivas para B220.
• Considerando a faixa de peso molecular relatada (130–144 kDa), que reflete o splicing alternativo e a glicosilação, confirme a expressão e o tamanho da banda por western blot se estiver adaptando este produto para métodos de detecção ortogonais, embora a aplicação primária validada seja a citometria de fluxo.

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