Anticorpo Monoclonal de Coelho PE/Cyanine7 Anti-TNF-α Humano para FC (intra) - P01375

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do TNF

• TNF-α (cachectina, TNF-alfa, TNFSF2) é uma citocina pró-inflamatória pleiotrópica pertencente à superfamília de ligantes do fator de necrose tumoral, existindo tanto como uma proteína transmembrana tipo II quanto como um homotrímero solúvel após clivagem proteolítica.
• É secretada principalmente por macrófagos ativados e se liga aos seus receptores TNFRSF1A/TNFR1 e TNFRSF1B/TNFBR, desencadeando vias de sinalização que podem levar à morte celular, sobrevivência, diferenciação ou proliferação, dependendo do contexto celular.
• TNF-α atua como um pirogênio endógeno, induzindo febre diretamente ou via estimulação de IL-1, e é um mediador chave da caquexia em inflamação crônica e câncer.
• Em células T reguladoras (Tregs), o TNF-α prejudica a função supressora por meio da regulação positiva da proteína fosfatase 1 (PP1), que desfosforila a FOXP3 na Ser-418, inativando assim a FOXP3 e comprometendo a atividade das Treg na artrite reumatoide. Referências relacionadas: PMID:23396208
• TNF-α pode mediar atividade anticâncer: em células de câncer de bexiga, neutrófilos estimulados por BCG matam células tumorais por meio de um mecanismo dependente de TNF-α que sinergiza com mimetizadores de SMAC. Referências relacionadas: PMID:16829952 PMID:22517918 PMID:23396208
• Promove angiogênese ao induzir sinergicamente a produção de VEGF com IL-1β e IL-6, e estimula a osteoclastogênese, contribuindo assim para a reabsorção óssea. Referências relacionadas: PMID:12794819
• O domínio intracelular (ICD) do TNF-α pode ser gerado por proteólise intramembranar regulada e demonstrou induzir a produção de IL-12 em células dendríticas.
• TNF-α está localizado na membrana celular e também é secretado; modificações pós-traducionais incluem glicosilação, fosforilação, miristoilação e formação de ligações dissulfeto, que modulam sua estabilidade e função.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogênio (aa 77-233) corresponde ao domínio extracelular solúvel do TNF-α humano; espera-se que este anticorpo reconheça tanto o precursor transmembrana quanto a citocina madura secretada.
• Para citometria de fluxo intracelular (FC intra), otimize as condições de fixação e permeabilização celular. Use células não estimuladas ou estímulos irrelevantes como controles negativos.
• Titular o anticorpo para determinar a concentração ideal de coloração para seu sistema experimental e tipo celular específicos.
• Como a reatividade cruzada é limitada ao humano, valide a especificidade em amostras humanas e considere o uso de controles biológicos correspondentes à espécie.

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