Anticorpo Monoclonal PE/Cianina7 Coelho anti-Humano/Macaco CD8a para Citometria de Fluxo - P01732

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da CD8a

• O gene CD8A codifica a cadeia alfa da glicoproteína CD8 da superfície de linfócitos T, um coreceptor essencial na imunidade adaptativa. Ele existe como um heterodímero alfa/beta ligado por pontes dissulfeto ou um homodímero alfa/alfa.
• A cadeia alfa da CD8 funciona como um coreceptor para moléculas MHC de classe I, interagindo simultaneamente com o receptor de célula T (TCR) e o MHC I em células apresentadoras de antígeno. Isso recruta a quinase Src LCK, ativando vias de sinalização downstream que levam à ativação de linfócitos T citotóxicos, produção de citocinas e eliminação de células alvo.
• Em células assassinas naturais (NK), os homodímeros de CD8A fornecem um mecanismo de sobrevivência e facilitam a conjugação e lise de múltiplas células alvo. Eles também promovem a sobrevivência e diferenciação de linfócitos ativados em células T CD8 de memória.
• A localização subcelular é principalmente na membrana celular, como uma proteína de membrana tipo I de passagem única. Uma forma solúvel secretada também é produzida por splicing alternativo.
• Especificidade tecidual: Em linfócitos T derivados do timo, a CD8 geralmente consiste em um heterodímero alfa/beta. Homodímeros de CD8A são encontrados em subconjuntos de células NK, células T de memória, linfócitos intraepiteliais, monócitos e células dendríticas. A expressão é upregulada em células dendríticas plasmocitóides após estimulação viral.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação, que explica o peso molecular superior ao previsto observado (~26 kDa não modificado; formas maduras de 21, 25 e 30 kDa), e palmitoilação, que ancora a proteína nas balsas lipídicas.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno usado para gerar este anticorpo é uma proteína recombinante correspondente aos aminoácidos 22-182, que abrange o domínio extracelular da CD8A. Esta região é crucial para a interação com o MHC I e está exposta na superfície celular, tornando-a um alvo ideal para aplicações de citometria de fluxo.
• Para citometria de fluxo (CF), titule o anticorpo para determinar a concentração ideal para a sua amostra específica. Inclua controles de isotipo apropriados conjugados com o mesmo fluoróforo (PE/Cianina7) para avaliar a ligação não específica.
• Como o PE/Cianina7 é um corante em tandem, evite a exposição prolongada à luz e a fixadores que podem degradar o corante. Considere usar um controle de compensação ao realizar painéis multicoloridos para corrigir a sobreposição espectral.
• Valide o desempenho do anticorpo usando populações celulares positivas e negativas conhecidas: por exemplo, linfócitos T de sangue periférico humano (positivos para CD8+) versus linfócitos B (negativos) ou linhas celulares apropriadas.
• Se for detectar CD8A intracelular (por exemplo, em linfócitos T ativados ou residentes em tecidos), otimize as condições de fixação e permeabilização que preservam o epitopo e o fluoróforo.

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