Anticorpo Monoclonal de Coelho PER2 (Humano) para WB, ELISA, ChIP - O15055

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PER2

• PER2 (Homólogo 2 da proteína circadiana Período), também conhecido como proteína PERÍODO 2 do relógio circadiano, é um componente central do relógio circadiano molecular. Ele funciona como repressor transcricional dentro do ciclo de retroalimentação transcrição/tradução (TTFL) que impulsiona ritmos de aproximadamente 24 horas na expressão gênica.
• Juntamente com PER1, CRY1 e CRY2, o PER2 forma o ramo negativo do TTFL. Ele interage diretamente com os heterodímeros CLOCK-BMAL1 nos promotores de caixa E para inibir a sua própria expressão, enquanto modificações pós-traducionais (ex.: fosforilação, acetilação, ubiquitinação) ajustam com precisão o período (tau) dos ritmos circadianos.
• O PER2 contribui para a repressão controlada pelo relógio por vários modos: ele recruta complexos de remodelação da cromatina SIN3-HDAC e metiltransferases de H3K9 (SUV39H1/2) para os promotores de genes do relógio, e também interage com proteínas de ligação ao RNA e helicases nos locais de terminação 3′ para modular a terminação da transcrição.
• A proteína está implicada na regulação metabólica e cardiovascular. Ela atua como coativador de PPARA e corepressor de NR1D1, liga-se ritmicamente a promotores de genes como BMAL1 e G6PC1, e repressa a adipogênese mediada por PPARG. O PER2 também regula a produção de óxido nítrico e prostaglandinas nas aortas e controla a captação de glutamato por meio da expressão de VGLUT1.
• Mutações bi-allelicas de perda de função no PER2 causam a síndrome da fase do sono avançada familiar (FASPS), o que ressalta o seu papel essencial na sincronização do relógio circadiano aos ciclos de claro-escuro ambientais.
• O PER2 localiza-se principalmente no núcleo, mas também é encontrado no citoplasma, na região perinuclear e no nucléolo, refletindo transporte dinâmico e funções específicas de cada compartimento.
• A proteína é amplamente expressa, com níveis elevados no músculo esquelético e pâncreas, e níveis mais baixos no pulmão. A isoforma 2 é detectada especificamente nos queratinócitos.
• As características estruturais principais incluem dois domínios PAS e um domínio de localização citoplasmático C-terminal que contribuem para interações proteicas e tráfego subcelular.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 1–100 do PER2 humano (O15055), uma região N-terminal que é bem conservada e provavelmente gera anticorpos que reconhecem tanto as isoformas de comprimento total quanto as truncadas.
• Para western blotting (WB), espere uma banda de aproximadamente 137 kDa; use lisados nucleares ou de células totais de tecidos humanos ou linhas celulares conhecidas por expressar PER2 (ex.: músculo esquelético, pâncreas). Os níveis endógenos de PER2 oscilam ao longo do ciclo circadiano — considere coletar amostras em tempos zeitgeber definidos.
• Para aplicações de ELISA, acoplar o anticorpo a um reagente de detecção que visa um epítopo não sobreposto pode melhorar a sensibilidade e especificidade; valide a faixa dinâmica usando proteína PER2 recombinante ou lisados celulares controlados.
• Na imunoprecipitação da cromatina (ChIP), o anticorpo pode enriquecer regiões promotoras contendo caixa E de genes controlados pelo relógio (ex.: PER1, CRY1). Inclua regiões de controle negativo adequadas e confirme o enriquecimento por qPCR em condições de relógio sincronizado.
• Dado o papel das modificações pós-traducionais na função do PER2, considere usar inibidores de fosfatase ou condições desnaturantes se estiver estudando interações ou localização dependentes de fosforilação.

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