Anticorpo Monoclonal de Coelho Phospho-Akt (S473) para WB, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de AKT (AKT1/AKT2/AKT3)

• AKT1 é uma proteína quinase serina/treonina e uma das três isoformas de AKT (AKT1, AKT2, AKT3) que mediam a sinalização a jusante de PI3K, regulando o metabolismo, a proliferação, a sobrevivência celular, o crescimento e a angiogênese. Referências relacionadas: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Ela fosforila GSK3 para regular a síntese de glicogênio e a proliferação celular, e promove a captação de glicose ao mediar a translocação induzida por insulina do transportador de glicose GLUT4.
• AKT1 promove a sobrevivência celular ao fosforilar fatores pró-apoptóticos, incluindo MAP3K5 (quinase relacionada ao sinal de apoptose), inibindo assim a apoptose induzida por estresse oxidativo. Referências relacionadas: PMID:11154276
• Através da fosforilação de TSC2 em Ser-939 e Thr-1462, AKT ativa a via mTORC1, aumentando a síntese proteica e o crescimento celular. Referências relacionadas: PMID:12150915 PMID:12172553
• AKT regula os fatores de transcrição FOXO ao fosforilar FOXO1, FOXO3 e FOXO4, levando à sua retenção citoplasmática e à inibição da expressão de genes pró-apoptóticos. Referências relacionadas: PMID:10358075
• Ela modula a transcrição dependente de NF-kappa-B e fosforila CREB1, induzindo a expressão de genes de sobrevivência celular como BCL2 e MCL1. Referências relacionadas: PMID:9829964
• AKT1 está localizada no citoplasma, núcleo, membrana celular e espaço intermitocondrial, refletindo seus diversos papéis funcionais.
• A proteína é amplamente expressa em todos os tipos de células humanas, com aumento da expressão e fosforilação observado durante a progressão do câncer de próstata e de mama.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo é produzido contra um peptídeo fosforilado correspondente a Ser473 da AKT1 humana; ele pode reconhecer o sítio de fosforilação equivalente em AKT2 e AKT3 devido à conservação da sequência.
• Para Western blot, inclua inibidores de fosfatase nos buffers de lise e considere usar um controle tratado com fosfatase para confirmar a especificidade por fosforilação.
• Pesos moleculares previstos: 48–55 kDa para diferentes isoformas de AKT; o bloqueio com o peptídeo fosforilado usado na imunização pode ajudar a verificar a identidade da banda.
• Para ELISA, otimize a concentração do antígeno de revestimento e considere o pareamento de anticorpos fosfo-específicos e totais para normalização.
• Valide o desempenho no sistema de amostra relevante e nas condições de tratamento (por exemplo, estimulação por fator de crescimento ou tratamentos com inibidores) antes do uso em larga escala.

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