Anticorpo Monoclonal de Coelho Phospho-AKT1-S124 para WB e ELISA - P31749

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do AKT1

• O AKT1 é uma serina/treonina proteína quinase pertencente à família AKT (AKT1, AKT2, AKT3) que regula processos-chave, incluindo metabolismo, proliferação, sobrevivência celular, crescimento e angiogênese (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:15861136). Referências relacionadas: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Sinaliza a jusante da PI3K para mediar os efeitos da insulina e fatores de crescimento, promovendo a captação de glicose (SLC2A4/GLUT4), síntese de glicogênio (via inibição de GSK3) e síntese proteica (via ativação de mTORC1) (PubMed:11994271, PubMed:12150915, PubMed:12172553). Referências relacionadas: PMID:11994271 PMID:12150915 PMID:12172553
• O AKT1 regula a sobrevivência celular fosforilando e inibindo fatores pró-apoptóticos: diminui a atividade de MAP3K5/ASK1 (PubMed:11154276), estimula BAD (PubMed:10926925) e ativa a transcrição de NF-kappa-B de BCL2/MCL1 (PubMed:9829964). Referências relacionadas: PMID:11154276 PMID:10926925 PMID:9829964
• A fosforilação dos fatores de transcrição FOXO (FOXO1, FOXO3, FOXO4) pelo AKT1 leva à ligação 14-3-3 e retenção citoplasmática, inibindo assim a transcrição de genes pró-apoptóticos e de paragem do ciclo celular (PubMed:10358075). Referências relacionadas: PMID:10358075
• Localizado no citoplasma, núcleo, membrana celular e espaço intermembranar mitocondrial, o AKT1 transloca dinamicamente em resposta a estímulos; nas mitocôndrias, modula a captação de cálcio e a atividade do canal TMEM175, independente da sua função quinase (PubMed:32228865, PubMed:30504268).
• Expresso de forma ubíqua em tecidos humanos, o AKT1 é frequentemente hiperativado em cancros; o fosfo-Tyr176 AKT1 elevado correlaciona-se com a progressão do cancro da mama de estágios normais para metastáticos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para garantir a especificidade fosfo, compare sinais de lisados tratados com e sem fosfatase lambda, ou realize ensaios de competição de peptídeos com o peptídeo imunogénico e a sua contraparte não fosforilada.
• Para Western blotting, os lisados devem ser preparados com inibidores de fosfatases; o peso molecular esperado é de aproximadamente 56 kDa; é recomendado um controlo de carga, como o AKT1 total ou GAPDH.
• Em aplicações ELISA, utilize o peptídeo fosforilado sintético como padrão para gerar uma curva de calibração para análise semiquantitativa de AKT1-S124 fosforilado em amostras biológicas.
• A ativação da fosforilação do AKT1 pode ser verificada em linhas celulares estimuladas por insulina ou fatores de crescimento; considere usar inibidores de PI3K (por exemplo, LY294002) para confirmar a dependência da via.

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