pAb de coelho anti-Phospho-AKT1-T308+AKT2-T309+AKT3-T305 - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da AKT1 (RAC-alfa serina/treonina-proteína quinase)

• A AKT1 (PKBα, RAC-PK-alfa) é uma serina/treonina quinase expressa ubiquamente que, juntamente com a AKT2 e a AKT3, forma a família da quinase AKT, central para a sinalização PI3K, governando o metabolismo, proliferação, sobrevivência, crescimento e angiogênese. Referências relacionadas: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• Através da fosforilação de inúmeros substratos, a AKT1 medeia a captação de glicose induzida por insulina (TBC1D4) e a síntese de glicogênio (GSK3A/GSK3B). Referências relacionadas: PMID:11994271
• Promove a sobrevivência celular ao fosforilar a MAP3K5/ASK1 na Ser-83, inibindo a apoptose, e impulsiona a sinalização mTORC1 via fosforilação de TSC2 e DEPDC5. Referências relacionadas: PMID:11154276 PMID:12150915 PMID:12172553 PMID:31548394 PMID:33594058
• A AKT1 regula os fatores de transcrição FOXO1/3/4 e CREB1, influenciando a expressão gênica pró-sobrevivência e a transcrição dependente de NF-κB. Referências relacionadas: PMID:10358075 PMID:9829964
• Subcelularmente, a AKT1 transita entre o citoplasma, núcleo, membrana celular e mitocôndrias, onde modula a captação de cálcio mitocondrial e outras funções específicas das organelas.
• Fosforilações ativadoras chave ocorrem na Thr-308 (ou Thr-309 equivalente na AKT2, Thr-305 na AKT3) no loop de ativação e na Ser-473 no motivo hidrofóbico, desencadeadas pela estimulação por fatores de crescimento.
• A AKT1 é frequentemente desregulada em cânceres (próstata, mama) e atua como um proto-oncogene, com níveis elevados de fosforilação correlacionando-se com a progressão da doença.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Use inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra para preservar o sinal de fosforilação; valide a fosfo-especificidade comparando com anticorpos AKT totais ou através de tratamento com fosfatase.
• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético ao redor da Thr-308 da AKT1 humana; espera-se que o anticorpo detecte AKT1, AKT2 e AKT3 fosforiladas em locais equivalentes quando testado nas espécies apropriadas.
• Para Western blot, espere múltiplas bandas correspondendo às várias isoformas de AKT (~48-55 kDa); confirme a identidade da banda com controles específicos de isoforma ou siRNA, se necessário.
• Para ELISA, considere uma configuração de par de anticorpos fosfo-específico/AKT total para normalizar o carregamento de proteína.
• Otimize a diluição do anticorpo primário para o seu tipo de amostra específico; as diluições iniciais sugeridas para WB são tipicamente 1:500-1:2000, mas devem ser determinadas empiricamente.

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