Anticorpo policlonal de coelho Phospho-AKT1-T308+AKT2-T309+AKT3-T305 para WB, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do AKT1

• AKT1 é uma das três serina/treonina-protein-quinases intimamente relacionadas (AKT1, AKT2, AKT3) que regulam o metabolismo, a proliferação, a sobrevivência celular, o crescimento e a angiogênese. Referências relacionadas: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136
• AKT1 fosforila mais de 100 substratos downstream, mediando os efeitos de fatores de crescimento como insulina, IGF1, PDGF e EGF. Referências relacionadas: PMID:21432781 PMID:12176338 PMID:12964941
• Na sinalização da insulina, AKT1 promove a captação de glicose ao acionar a translocação de SLC2A4/GLUT4 e fosforila GSK3A/B para estimular a síntese de glicogênio.
• AKT1 regula a sobrevivência celular ao fosforilar MAP3K5/ASK1 na Ser-83, inibindo a apoptose induzida por estresse oxidativo. Referências relacionadas: PMID:11154276
• AKT1 ativa o mTORC1 ao fosforilar TSC2 na Ser-939 e na Thr-1462, promovendo assim a síntese de proteínas e o crescimento celular. Referências relacionadas: PMID:12150915 PMID:12172553
• AKT1 fosforila os fatores de transcrição FOXO (FOXO1, FOXO3, FOXO4), levando à ligação de 14-3-3 e ao sequestro citoplasmático, promovendo a proliferação e a sobrevivência celular. Referências relacionadas: PMID:10358075
• A localização subcelular inclui o citoplasma, o núcleo, a membrana celular e o espaço intermembranar mitocondrial, com translocação regulada dependente dos estímulos.
• A ativação aberrante de AKT1 está associada ao câncer; sua expressão aumenta nos cânceres de próstata e de mama, e a fosforilação de Tyr-176 se correlaciona com os estágios de malignidade.
• A fosforilação na Thr-308 na alça de ativação é necessária para a atividade cinásica de AKT1, e este sítio é conservado em AKT2 (Thr-309) e AKT3 (Thr-305).

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético ao redor da Thr-308 do AKT1 humano; espera-se que o anticorpo reconheça as formas fosforiladas de AKT1 (p-T308), AKT2 (p-T309) e AKT3 (p-T305).
• Para Western blot, espera-se uma banda em torno de 48–55 kDa dependendo da isoforma e das modificações pós-traducionais; considere usar inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra para preservar as fosforilações.
• Valide a especificidade do anticorpo tratando as amostras com lambda fosfatase ou usando bloqueio com peptídeo não fosforilado.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado para detectar AKT fosforilado em lisados celulares; faça a titulação do anticorpo e use controles adequados de proteína fosforilada e total.
• A reatividade cruzada é indicada para humano e camundongo; espécies adicionais podem necessitar de validação empírica.

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