Fosfo-AKT1-T450 + AKT2-T451 + AKT3-T447 mAb de Coelho para WB, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Família AKT

• A família AKT compreende três serina/treonina-proteína quinases intimamente relacionadas: AKT1 (PKB alfa, P31749), AKT2 (PKB beta, P31751) e AKT3 (PKB gama, Q9Y243), codificadas pelos genes AKT1, AKT2 e AKT3, respectivamente. Elas compartilham alta homologia de sequência e papéis biológicos sobrepostos, mas distintos.
• As quinases AKT regulam diversos processos celulares, incluindo metabolismo, proliferação, sobrevivência celular, crescimento e angiogênese, fosforilando uma ampla gama de substratos a jusante (mais de 100 relatados).
  Referências relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• Após a ativação por fatores de crescimento e sinalização PI3K, a AKT medeia a captação de glicose induzida por insulina via translocação de SLC2A4/GLUT4, promove a síntese de glicogênio inibindo a GSK3 e estimula a síntese proteica através da ativação da via mTORC1.
  Referências relacionadas: PMID:11994271, PMID:12150915, PMID:12172553
• A AKT promove a sobrevivência celular fosforilando e inativando fatores pró-apoptóticos, como MAP3K5/ASK1 e BAD, e ativando fatores de transcrição como CREB1, que impulsionam a expressão de genes antiapoptóticos.
  Referências relacionadas: PMID:11154276, PMID:9829964, PMID:10926925
• A localização subcelular inclui citoplasma, núcleo, membrana celular e espaço intermembranar mitocondrial, refletindo seus amplos papéis de sinalização em respostas celulares compartimentalizadas.
• Modificações pós-traducionais, particularmente a fosforilação, são críticas para a atividade da AKT; dois resíduos-chave (Thr-308 e Ser-473 na AKT1) são essenciais para a ativação completa, enquanto a fosforilação no motivo de virada (Thr-450 na AKT1, equivalente a Thr-451 na AKT2 e Thr-447 na AKT3) pode influenciar a estabilidade da quinase e as interações proteicas.
• A AKT1 é expressa de forma onipresente, com expressão e fosforilação alteradas ligadas a estados de doença, incluindo câncer; níveis elevados de fosfo-AKT são frequentemente observados em cânceres de mama e próstata.
• Palavras-chave associadas à AKT1 (UniProt P31749) incluem apoptose, metabolismo de carboidratos, membrana celular, citoplasma, quinase, núcleo, fosfoproteína, proto-oncogene, serina/treonina-proteína quinase e regulação de tradução.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético que abrange a região Thr-450 da AKT1 humana; espera-se que o anticorpo reconheça AKT1, AKT2 e AKT3 quando fosforiladas nos respectivos sítios equivalentes (T450/T451/T447).
• Para o Western blotting, prepare lisados com inibidores de fosfatases para preservar a fosforilação; bandas esperadas em torno de 48–55 kDa, dependendo da isoforma. Inclua controles positivos apropriados (por exemplo, células estimuladas por fatores de crescimento) e controles negativos (amostras não tratadas ou tratadas com fosfatase).
• Considere o uso de amostras tratadas com fosfatase ou um controle de bloqueio com peptídeo não fosforilado para confirmar a especificidade fosfo do sinal.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), otimize as condições de recuperação de antígenio e inclua controles de tecido positivos/negativos para validar a coloração; sinais específicos para fosfo podem ser sensíveis à fixação e ao processamento.
• Para ELISA, emparelhe com reagentes de captura/detecção apropriados e valide o ensaio usando concentrações conhecidas de peptídeo fosforilado ou lisados celulares.

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