Anticorpo Monoclonal de Coelho Phospho-AKT1S1/PRAS40-T246 para WB, ELISA - Q96B36

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do AKT1S1/PRAS40

• O substrato 1 rico em prolina da AKT1 (AKT1S1), também comumente referido como PRAS40 (substrato rico em prolina da AKT de 40 kDa), é codificado pelo gene AKT1S1 em humanos.
• O AKT1S1 atua como um regulador negativo chave do alvo mecanicista da rapamicina complexo 1 (mTORC1), um sensor central de nutrientes que promove o crescimento celular e o acúmulo de biomassa. Ele inibe diretamente a atividade do mTORC1 bloqueando o local de recrutamento de substratos da quinase MTOR. Referências relacionadas: PMID:17277771, PMID:17386266, PMID:17510057, PMID:29236692
• Em resposta à insulina e aos nutrientes, o AKT1S1 dissocia-se do mTORC1, aliviando a inibição e permitindo que a sinalização do mTORC1 prossiga, um processo intimamente ligado ao seu estado de fosforilação e associação com proteínas 14-3-3. Referências relacionadas: PMID:17386266, PMID:18372248, PMID:16174443
• Predominantemente localizado no citoplasma e citosol, o AKT1S1 é amplamente expresso nos tecidos, com os níveis mais altos observados no fígado e no coração. Notavelmente, sua expressão é frequentemente elevada em linhagens de células cancerígenas, como A-549 e HeLa, em comparação com linhagens celulares normais.
• A proteína sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação em vários resíduos e metilação, e está sujeita a splicing alternativo, contribuindo para sua regulação funcional.
• Além da sinalização metabólica, o AKT1S1 também pode desempenhar um papel na neuroproteção mediada pelo fator de crescimento nervoso, embora essa função seja principalmente inferida a partir da similaridade com outras espécies.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi gerado usando um fosfopeptídeo sintético correspondente ao local de fosforilação Thr246. Para manter a detecção específica para fosfo, considere o uso de inibidores de fosfatases durante as etapas de lise de células/tecidos e imunoprecipitação.
• Para western blotting (WB), uma banda proteica de aproximadamente 27 kDa é esperada com base no peso molecular calculado do AKT1S1.
• Ao realizar ELISA, o bloqueio apropriado de peptídeos e controles de peptídeos fosforilados/não fosforilados podem ajudar a confirmar a especificidade para a forma fosforilada em T246.
• Dada a expressão onipresente e a fosforilação condicional do AKT1S1, recomenda-se validar o desempenho do anticorpo no sistema de amostra relevante (por exemplo, células estimuladas com insulina versus células privadas).

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