pAb de coelho para Phospho-AKT1S1/PRAS40-T246 para WB, ELISA - Q96B36

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de AKT1S1/PRAS40

• AKT1S1 (também conhecido como PRAS40, substrato de AKT rico em prolina de 40 kDa) é um regulador negativo do alvo mecânico do complexo 1 de rapamicina (mTORC1), um sensor central de nutrientes evolutivamente conservado que estimula reações anabólicas e biossíntese de macromoléculas para promover a geração de biomassa celular e o crescimento. Referências relacionadas: PMID:17277771 | PMID:17386266 | PMID:17510057
• Na ausência de insulina e nutrientes, AKT1S1 se associa ao complexo mTORC1 e inibe diretamente a atividade de mTORC1 ao bloquear o sítio de recrutamento de substrato de MTOR. Referências relacionadas: PMID:29236692
• Em resposta à insulina e nutrientes, AKT1S1 se dissocia de mTORC1, um processo que depende do seu estado de fosforilação e da ligação às proteínas 14-3-3. Referências relacionadas: PMID:17386266 | PMID:18372248 | PMID:16174443
• A fosforilação em Thr246 (o sítio do imunógeno) promove a ligação de 14-3-3 e remove a inibição de mTORC1.
• AKT1S1 se localiza predominantemente no citoplasma e no citosol.
• É amplamente expresso com níveis mais altos no fígado e no coração; a expressão é elevada em algumas linhas de células cancerosas (por exemplo, A-549, HeLa) em comparação com células normais (por exemplo, HEK293).
• Também pode desempenhar um papel na neuroproteção mediada pelo fator de crescimento nervoso (Por similaridade).
• Classificado como fosfoproteína com peso molecular calculado de aproximadamente 27 kDa (UniProt: 27383 Da); sofre splicing alternativo.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo detecta especificamente a forma fosforilada de Thr246 de AKT1S1; ele não reconhece a proteína não fosforilada. Inclua lisados tratados com fosfatase como controle negativo para confirmar o sinal dependente de fosforilação.
• Para Western blotting, espera-se uma banda próxima a 27 kDa. Use inibidores de fosfatase nos tampões de lise para preservar os estados de fosforilação.
• Em aplicações de ELISA, considere a cobertura com o imunógeno fosfo-peptídeo e valide a especificidade contra o peptídeo não fosforilado correspondente.
• Ao estudar a sinalização de mTORC1, estimule as células com insulina ou fatores de crescimento para induzir a fosforilação de AKT1S1 e monitore a dissociação do complexo mTORC1.
• Valide o anticorpo no seu sistema experimental; linhas de células cancerosas humanas (por exemplo, HeLa, A-549) podem exibir maior expressão endógena, facilitando a detecção.

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