Phospho-ATR-S428 Rabbit pAb para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13535

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ATR

• Atua como um sensor de danos ao DNA, ativando a sinalização de ponto de verificação em resposta à radiação ionizante, luz UV ou estresse de replicação. Referências relacionadas: PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Fosforila alvos a jusante no motivo de consenso [ST]-Q, incluindo BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 e p53/TP53, levando à inibição da replicação do DNA e mitose, e promoção do reparo do DNA, recombinação e apoptose. Referências relacionadas: PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Fosforila a histona H2AX em Ser-139 em focos de danos ao DNA, um evento crítico na resposta a danos ao DNA. Referências relacionadas: PMID:11673449
• Necessário para a ubiquitinação de FANCD2 e crítico para a manutenção da estabilidade de locos frágeis e regulação da duplicação do centrômero. Referências relacionadas: PMID:15314022 PMID:12526805
• Regula a transição do ciclo celular S-G2 restringindo a atividade de CDK1 durante a fase S para evitar a entrada prematura em G2. Referências relacionadas: PMID:30139873
• Realoca-se para o envelope nuclear sob estresse mecânico e media um ponto de verificação através da fosforilação de CHEK1; também promove a ruptura do envelope nuclear e a ruptura do envelope micronuclear através da fosforilação de LMNA, desencadeando a via imune inata cGAS-STING. Referências relacionadas: PMID:25083873 PMID:37788673 PMID:37832547
• Localiza-se predominantemente no núcleo e cromossomo, e é amplamente expresso, com os níveis mais altos nos testículos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como o imunógeno é um fosfopeptídeo em torno de Ser428, o anticorpo deve reconhecer especificamente o ATR fosforilado neste local. Valide a especificidade de fosforilação tratando as amostras com fosfatase ou competindo com o peptídeo não fosforilado.
• Para western blotting, note o alto peso molecular do ATR (~301 kDa). Use um gel com baixa porcentagem (por exemplo, 6% ou gradiente 4-12%) e transferência úmida prolongada (por exemplo, durante a noite a 4°C) para garantir uma transferência eficiente.
• O ATR é uma proteína de baixa abundância; considere o enriquecimento por imunoprecipitação ou o uso de um substrato de detecção de alta sensibilidade.
• Para imuno-histoquímica e imunofluorescência, inclua etapas apropriadas de recuperação de antígeno e valide a coloração com um controle negativo (por exemplo, bloqueio de peptídeo ou secções tratadas com fosfatase).
• Sempre inclua inibidores de fosfatase nos tampões de lise para preservar o estado de fosforilação durante o preparo da amostra.
• Como um anticorpo policlonal de coelho, pode ocorrer variabilidade entre lotes; recomendamos revalidar em seu contexto experimental específico.

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