Fosfo-ATR-T1989 pAb de Coelho para WB, IHC-P, ELISA - Q13535

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Proteína Quinase Serina/Treonina ATR

• ATR é uma proteína quinase serina/treonina também conhecida como proteína relacionada à ataxia telangiectasia e Rad3 ou proteína relacionada a FRAP 1. É codificada pelo gene ATR (FRP1) e existe como pelo menos duas isoformas, sendo a isoforma 2 encontrada no pâncreas, placenta e fígado, mas não no coração, testículo e ovário.
• Funciona como uma quinase sensora chave de danos no DNA, ativando a sinalização de pontos de verificação após estresses genotóxicos, como radiação ionizante, luz UV ou estagnação da replicação do DNA (PubMed:10597277, PubMed:10608806, PubMed:10859164). Referências relacionadas: PMID:10597277 PMID:10608806 PMID:10859164
• Reconhece a sequência consenso de substrato [ST]-Q e fosforila alvos a jusante, incluindo BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 e p53/TP53, inibindo assim a replicação do DNA e a mitose, promovendo reparo, recombinação e apoptose (PubMed:11114888, PubMed:11418864, PubMed:11865061). Referências relacionadas: PMID:11114888 PMID:11418864 PMID:11865061
• Fosforila o 'Ser-139' da histona H2AX nos locais de danos no DNA, regulando a resposta a danos no DNA (PubMed:11673449); também necessária para a ubiquitinação de FANCD2. Referências relacionadas: PMID:11673449
• Regula as transições do ciclo celular restringindo a atividade de CDK1 durante a fase S para evitar a entrada prematura em G2 e é crítica para a estabilidade de loci frágeis e duplicação correta do centrossomo (PubMed:12526805, PubMed:30139873). Referências relacionadas: PMID:12526805 PMID:30139873
• Atua como um sensor de estresse mecânico no envelope nuclear, onde se realoca após estresse e fosforila CHEK1 para mediar um ponto de verificação (PubMed:25083873). Também promove a ruptura do envelope nuclear após danos no DNA, fosforilando LMNA em 'Ser-282' (PubMed:37832547). Referências relacionadas: PMID:25083873 PMID:37832547
• Envolvido na imunidade inata: ATR se localiza em micronúcleos decorrentes da instabilidade do genoma e fosforila LMNA em 'Ser-395', levando à ruptura do envelope micronuclear e ativação da via cGAS-STING (PubMed:37788673). Referências relacionadas: PMID:37788673
• A localização subcelular é predominantemente nuclear e associada a cromossomos; também encontrada no envelope nuclear. Expressa ubiquamente com os níveis mais altos no testículo. Classificada sob palavras-chave, incluindo fosfoproteína, dano no DNA, reparo de DNA, quinase e splicing alternativo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético ao redor de T1989, portanto, este anticorpo deve reconhecer especificamente o ATR fosforilado neste local. Para validação, considere usar um peptídeo não fosforilado ou lisatos tratados com fosfatase como controles negativos.
• No Western blot (WB), espera-se uma banda em torno de 301 kDa. Devido ao alto peso molecular, otimize as condições de transferência (por exemplo, baixo metanol, tempos de transferência longos) e use um controle de carregamento validado de tamanho semelhante.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P) e ELISA, garanta passagens apropriadas de recuperação de antígeno e bloqueio; a reatividade cruzada com camundongo e rato permite o uso em modelos roedores, mas confirme com controles de tecido relevantes.
• Como a fosforilação do ATR é induzida por danos no DNA, o tratamento de células com agentes genotóxicos (por exemplo, UV, hidroxiureia) pode aumentar a detecção do sinal.

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