mAb de Coelho contra Phospho-Bad-S112 para WB, IHC-P, ELISA - Q92934

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de Bad (agonista associado a Bcl2 da morte celular)

• Bad (agonista associado a Bcl2 da morte celular, também conhecido como componente 6 de ligação a Bcl-2, proteína semelhante a Bcl-2 8) é um membro pró-apoptótico da família Bcl-2 que promove a morte celular competindo pela ligação às proteínas anti-apoptóticas Bcl-X(L), Bcl-2 e Bcl-W.
• Essa competição interrompe a heterodimerização de Bcl-X(L) com BAX, revertendo assim a atividade repressora da morte de Bcl-X(L), embora não de Bcl-2, e conecta a sinalização do receptor de fator de crescimento à apoptose (Por similaridade).
• O gene BAD (ID do Gene: 572) codifica um único produto proteico com peso molecular de aproximadamente 18 kDa, confirmado pelo UniProt (Q92934, 18392 Da).
• Bad está localizado na membrana externa mitocondrial e no citoplasma, onde integra sinais de sobrevivência e morte; sua atividade é rigidamente regulada por modificações pós-traducionais.
• Várias modificações pós-traducionais chave foram identificadas em Bad, incluindo fosforilação, acetilação e metilação, que modulam sua função pró-apoptótica e localização subcelular.
• A fosforilação em Ser-112 (e sítios adjacentes) inativa Bad ao promover sua ligação a proteínas 14-3-3 e seu sequestro no citoplasma, impedindo a translocação mitocondrial e a apoptose.
• Bad é expresso em uma ampla variedade de tecidos, consistente com seu papel fundamental na regulação da morte celular programada em diferentes tipos de células.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Como o imunógeno é um fosfopeptídeo sintético que abrange o S112 do Bad humano, espera-se que esse anticorpo reconheça especificamente a forma fosforilada em Ser-112; é aconselhável verificar a fosfoespecificidade usando lisados tratados com fosfatase ou um anticorpo anti-Bad não fosfoespecífico como controle.
• Para análise de Western blot (WB), o peso molecular previsto de Bad é 18 kDa; uma única banda em aproximadamente esse tamanho deve ser detectada em condições ótimas, embora os usuários devam validar o sinal no sistema de amostra e fluxo de trabalho experimental relevante.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), as condições de recuperação de antígeno e bloqueio devem ser otimizadas empiricamente; a localização esperada é mitocondrial e citoplasmática, portanto os padrões de coloração devem ser avaliados de acordo.
• Em aplicações de ELISA, esse anticorpo pode ser usado para captura ou detecção de Bad fosforilado em lisados de células ou tecidos; recomenda-se validar as condições do ensaio com controles positivos e negativos apropriados.
• Dada a reatividade cruzada com Bad de camundongo e rato, esse anticorpo é adequado para estudos nesses organismos modelo comuns; no entanto, os usuários devem confirmar que a sequência ao redor de S112 é conservada nessas espécies.

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