Anticorpo Policlonal de Coelho Phospho-BRD4 (S492/S494) para WB, DB, ELISA - O60885

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de BRD4

• BRD4 é um membro da família bromodomain e extraterminal (BET), funcionando como um leitor de cromatina que se liga a histonas acetiladas para transmitir memória epigenética entre as divisões celulares. Referências relacionadas: PMID:20871596, PMID:23086925, PMID:23317504
• Ele permanece associado à cromatina acetilada durante todo o ciclo celular, mantendo a estrutura de cromatina de alta ordem para a transcrição do gene pós-mitótica G1. Referências relacionadas: PMID:22334664, PMID:23317504, PMID:23589332
• BRD4 recruta o complexo P-TEFb para promotores de genes e enhancers distais, levando à fosforilação da CTD da RNA polimerase II e à ativação da transcrição induzida por sinal. Referências relacionadas: PMID:16109376, PMID:16109377, PMID:19596240
• Ele também recruta P-TEFb para RELA acetilado, ligando BRD4 à ativação da via NF-kappa-B. Referências relacionadas: PMID:19103749
• A fosforilação em resíduos como S492 e S494 por CK2 facilita a interação de BRD4 com promotores direcionados a p53/TP53. Referências relacionadas: PMID:23317504
• Na resposta ao dano do DNA, BRD4 atua como um isolador de cromatina recrutando condensina-2 para histonas acetiladas, limitando a disseminação da fosforilação de H2A.X.
• BRD4 se localiza no núcleo e nos cromossomos; é expresso de forma ubíqua e sofre splicing alternativo e modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e ubiquitinação.
• Além disso, BRD4 regula a diferenciação de células T CD4+ em células Th17 (Por similaridade).

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Para Western blot, prepare lisados com inibidores de fosfatases para preservar a fosforilação e use um gel SDS-PAGE de baixa porcentagem (ex: 6–8%) para uma separação ideal da proteína BRD4 de ~152 kDa.
• Os ensaios de Dot blot e ELISA podem se beneficiar do bloqueio com BSA livre de fosfato para reduzir o fundo; confirme a especificidade usando competição com peptídeo não fosforilado.
• A reatividade do anticorpo em amostras humanas sugere seu uso com linhas celulares humanas; valide a reatividade cruzada no seu sistema alvo, conforme necessário.
• Considere o uso de controles positivos apropriados, como lisados de células tratadas com inibidores de fosfatases ou indutores conhecidos de fosforilação.

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