Fosfo-CDK1-T161 pAb de Coelho - P06493

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CDK1

• O CDK1 (também conhecido como CDC2) é uma serina/treonina proteína quinase essencial para a transição G2-M no ciclo celular, fosforilando numerosos substratos para impulsionar eventos mitóticos. Referências relacionadas: PMID:16407259, PMID:16933150, PMID:17459720
• Sua ativação requer fosforilação em Thr161 pelo complexo da quinase ativadora de CDK (CAK), enquanto a fosforilação inibitória em Thr14 e Tyr15 por WEE1 e PKMYT1 a mantém inativa; a desfosforilação pelas fosfatases CDC25 desencadeia a entrada mitótica. Referências relacionadas: PMID:18480403, PMID:20360007, PMID:2188730, PMID:41100585
• O CDK1 fosforila lâminas nucleares (LMNA, LMNB1, LMNB2) causando a quebra do envelope nuclear durante a mitose. Referências relacionadas: PMID:2188730, PMID:2344612, PMID:37788673
• Após danos no DNA, o CDK1 é inativado via PKR/WEE1 para impor prisão em G2, e reativado após o reparo através da sinalização WIP1/CDC25. Referências relacionadas: PMID:20360007, PMID:20395957
• O CDK1 se localiza em múltiplos compartimentos subcelulares, incluindo o núcleo, citoplasma, mitocôndria, centrossomo e fuso mitótico, permitindo a coordenação de diversos processos mitóticos.
• O CDK1 participa da regulação do relógio circadiano fosforilando NR1D1, marcando-o para degradação; também atua como receptor para a entrada do vírus da hepatite C em hepatócitos. Referências relacionadas: PMID:27238018

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como este anticorpo tem como alvo um sítio de fosforilação (Thr161), mantenha o estado de fosforilação durante o preparo da amostra incluindo inibidores de fosfatases e evitando aquecimento em tampões livres de fosfato.
• Para Western blot, espera-se uma banda em aproximadamente 34 kDa; considere o uso de lisados de células mitóticas (por exemplo, células presas em G2/M) como controles positivos e o tratamento com fosfatase lambda como controle negativo.
• Na imunoprecipitação, o desempenho do anticorpo pode depender da abundância do epítopo fosforilado; enriqueça células mitóticas para melhorar a detecção.
• Para imunofluorescência e IHC, a recuperação de antígeno padrão acoplada à fixação rápida pode preservar o sinal de fosforilação; recomenda-se realizar experimentos piloto para otimizar a detecção.
• Embora listado para ELISA, pode ser necessário o revestimento direto com o peptídeo fosforilado; ELISAs competitivos podem ser desenhados para quantificar níveis de fosforilação.

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