Anticorpo Monoclonal de Coelho Phospho-CEBPB (T235) para WB, IHC-P, ELISA - P17676

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CEBPB

• CEBPB (C/EBP-beta, NF-IL6, TCF-5) é um membro da família de fatores de transcrição de ligação ao enhancer CCAAT e funciona como um regulador crítico das respostas imunes e inflamatórias, adipogênese, regeneração hepática e hematopoiese. Referências relacionadas: PMID:12048245, PMID:1741402, PMID:18647749

• A proteína se liga ao motivo de consenso de DNA 5'-T[TG]NNGNAA[TG]-3' e regula a transcrição de genes de fase aguda e citocinas, desempenhando um papel central na resposta inflamatória e na morte de bactérias intracelulares.

• Durante a adipogênese, o CEBPB é rapidamente expresso e, após a fosforilação, induz o CEBPA e o PPARG, que impulsionam a expressão de genes específicos de adipócitos. A transativação tardia parece necessária para permitir a expansão clonal mitótica e a diferenciação terminal. Referências relacionadas: PMID:20829347

• A isoforma LIP funciona como um regulador negativo dominante por meio da heterodimerização com a isoforma LAP. O CEBPB também promove a diferenciação de osteoblastos e a osteoclastogênese. Referências relacionadas: PMID:11741938

• O CEBPB é localizado principalmente no núcleo, mas também pode ser detectado no citoplasma, consistente com seu papel de transporte (shuttling) na ativação transcricional dependente de sinal.

• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, metilação e ubiquitinação, modulam sua atividade transcricional e estabilidade proteica.

• A expressão tecidual é ampla, mas baixa; níveis detectáveis são observados no pulmão, rim e baço.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo monoclonal recombinante de coelho foi gerado contra um peptídeo fosforilado sintético em torno da treonina 235. Confirme a especificidade fosfo-específica pelo tratamento das amostras com fosfatase ou por inibição competitiva com peptídeo não fosforilado em seu sistema de ensaio.
• Para Western blot, espere uma banda principal em torno de 36 kDa. Use lisatos recém-preparados e inibidores de fosfatase para preservar o sinal de fosforilação. Otimize as condições de bloqueio e incubação do anticorpo para minimizar a ligação inespecífica.
• Em aplicações de IHC-P, o método de recuperação de antígeno e as condições de fixação podem afetar a integridade do epítopo fosforilado. Considere testar tecidos de controle positivo conhecidos, como macrófagos estimulados por lipopolissacarídeo (LPS) ou adipócitos em diferenciação, para validar a coloração.
• Para ELISA, inclua controles de peptídeo fosforilado e não fosforilado para estabelecer a especificidade do ensaio e a faixa dinâmica.

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