Phospho-Chk1-S317 Anticorpo Policlonal de Coelho (WB, ELISA) - O14757

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Chk1

• A serina/treonina proteína quinase Chk1 (CHEK1) é uma quinase crítica de ponto de verificação do ciclo celular que garante a integridade do genoma mediando a prisão do ciclo celular e o reparo do DNA após danos ao DNA ou estresse de replicação. Referências relacionadas: PMID:11535615, PMID:12399544, PMID:12446774
• O Chk1 fosforila CDC25A, CDC25B e CDC25C, levando à sua inibição via ligação 14-3-3 ou degradação proteassomal, impedindo assim a ativação de CDK-ciclina e bloqueando a progressão do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:12676583, PMID:12676925, PMID:12759351, PMID:9278511, PMID:19734889, PMID:20090422
• Fosforila diretamente RAD51 em Thr-309 para promover o reparo por recombinação homóloga, TP53 em múltiplos sítios C-terminais para aumentar sua ativação e prisão do ciclo celular, e FANCE para facilitar o reparo de ligações cruzadas do DNA. Referências relacionadas: PMID:15665856, PMID:10673501, PMID:15659650, PMID:16511572, PMID:17296736
• O Chk1 fosforila TLK1 em Ser-743, impedindo a fosforilação de ASF1A e aumentando a montagem da cromatina, e também regula PCNA para a manutenção do garfo de replicação. Referências relacionadas: PMID:12660173, PMID:12955071, PMID:18451105
• Além disso, o Chk1 fosforila a histona H3.1 (H3T11ph) para silenciar genes epigeneticamente, fosforila RB1 para promover a interação E2F e ataca SPRTN e PABIR1/FAM122A para modular o estresse de replicação e o ponto de verificação G2/M. Referências relacionadas: PMID:17380128, PMID:31316063, PMID:33108758
• Uma variante de splicing endógena atua como um repressor do Chk1 de comprimento total, antagonizando sua função para promover a transição de S para G2/M.
• Subcelularmente, o Chk1 localiza-se no núcleo, cromossomos, citoplasma e centríolos, com enriquecimento no centríolo durante a mitose.
• Expresso de forma onipresente, com os níveis mais altos no timo, testículo, intestino delgado e cólon.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético em torno de Ser317; certifique-se de que o preparo da amostra inclua inibidores de fosfatases para preservar a fosforilação endógena neste local.
• Para Western blotting, espera-se uma banda específica em ~54 kDa. Valide a especificidade tratando lisados celulares com lambda fosfatase ou usando anticorpos Chk1 não específicos para fosfo como controles.
• Em ELISA, use peptídeo imobilizado ou lisados celulares e considere o bloqueio com peptídeos fosforilados versus não fosforilados para confirmar a especificidade para fosfo.
• Otimize a diluição do anticorpo para seu sistema experimental específico; as diluições iniciais típicas para WB são de 1:500–1:2000, mas a determinação empírica é recomendada.
• A reatividade cruzada foi confirmada para amostras humanas; para outras espécies, verifique a homologia da sequência em torno de Ser317 e teste experimentalmente.

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