Fosfo-Chk1-S345 mAb de Coelho para WB, ELISA - O14757

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Fosfo-Chk1-S345

• A serina/treonina proteína quinase Chk1, codificada pelo gene CHEK1, também é conhecida como homólogo do ponto de verificação CHK1, quinase do ponto de verificação do ciclo celular e quinase de ponto de verificação-1.
• Necessária para a prisão do ciclo celular mediada por ponto de verificação e ativação do reparo de DNA em resposta a danos no DNA ou DNA não replicado. Referências relacionadas: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Liga-se e fosforila CDC25A, CDC25B e CDC25C, criando sítios de ligação 14-3-3 que inibem sua atividade de fosfatase e promovem a degradação de CDC25A, bloqueando finalmente a progressão do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:9278511 PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:19734889 PMID:20090422
• Fosforila RAD51 em Thr-309, promovendo sua liberação de BRCA2 e aumentando a associação à cromatina para o reparo por recombinação homóloga. Referências relacionadas: PMID:15665856
• Fosforila múltiplos sítios C-terminais de TP53, facilitando sua ativação dependente de acetilação para induzir a prisão do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Também fosforila NEK6, TLK1, FANCE, SPRTN e PABIR1/FAM122A, contribuindo para diversos processos como montagem de cromatina, reparo de ligações cruzadas de DNA e resposta ao estresse de replicação. Referências relacionadas: PMID:18728393 PMID:12660173 PMID:12955071 PMID:17296736 PMID:31316063 PMID:33108758
• Localiza-se predominantemente no núcleo e cromossomo, mas também é encontrado no citoplasma, citoesqueleto e centrossoma.
• Expresso ubiquamente, com os níveis mais altos no timo, testículo, intestino delgado e cólon.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O design do imunógeno utiliza um peptídeo fosforilado sintético em torno de Ser345 do Chk1 humano; confirme a especificidade tratando lisados com lambda fosfatase para abolir o sinal.
• Para western blot, considere o uso de agentes indutores de danos no DNA (por exemplo, etoposídeo, hidroxiureia) para enriquecer o Fosfo-Chk1-S345 em linhagens celulares humanas ou de camundongo.
• O ELISA pode ser realizado com peptídeo capturado ou lisados; inclua peptídeo não fosforilado como controle negativo para verificar a especificidade fosfo.
• A reatividade cruzada de espécies é relatada para humano e camundongo; valide o desempenho na espécie alvo antes de estudos em grande escala.

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