Phospho-DRP1-S616 Rabbit mAb - O00429

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DRP1

• A proteína semelhante à dinamina-1 (DNM1L), comumente denominada DRP1, é um membro da superfamília das grandes GTPases da dinamina, também conhecida como DLP1, DVLP e Dymple.
• A DRP1 medeia a fissão mitocondrial e peroxissomal ao oligomerizar em estruturas tubulares associadas à membrana que envolvem os locais de cisão, contraindo e cortando as membranas por meio de um mecanismo dependente da hidrólise de GTP. Referências relacionadas: PMID:11514614, PMID:12499366, PMID:17301055, PMID:23530241, PMID:23584531, PMID:33850055
• A recrutamento para as membranas mitocondriais é conduzido por receptores como MFF, MIEF1 e MIEF2 de maneira dependente de GTP; a hidrólise subsequente de GTP libera a DRP1 e permite que os anéis de filamentos se fechem e cortem a membrana dupla. Referências relacionadas: PMID:23283981, PMID:23921378, PMID:29899447
• A DRP1 promove a fissão mitocondrial durante a mitose e atua a jusante de PINK1 em uma via dependente de PRKN; sua fosforilação rítmica em Ser-637 controla a produção circadiana de ATP. Referências relacionadas: PMID:19411255, PMID:26992161, PMID:27301544, PMID:29478834, PMID:32484300
• A DRP1 é necessária para o desenvolvimento normal do cérebro, incluindo o cerebelo, e é essencial para a sobrevivência neuronal pós-mitótica ao suprimir danos oxidativos; também facilita a apoptose durante o desenvolvimento da formação do tubo neural. Referências relacionadas: PMID:17460227, PMID:26992161, PMID:27145208
• Expressa-se de forma ubíqua, com níveis mais elevados no músculo esquelético, coração, rim e cérebro; múltiplas isoformas apresentam padrões tecido-específicos, incluindo uma isoforma 1 específica do cérebro e as isoformas 2 e 3 enriquecidas no testículo e músculo esquelético.
• A localização subcelular inclui a membrana externa mitocondrial, peroxissomos, citosol, aparelho de Golgi, poços revestidos de clatrina e membranas de vesículas sinápticas; a DRP1 sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, S-nitrosilação e ubiquitinação.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopepetídeo sintético correspondente aos resíduos ao redor de Ser-616 da DRP1 humana. Espera-se que o anticorpo reconheça especificamente a DRP1 apenas quando fosforilada neste sítio.
• Para western blotting, considere o uso de inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra para preservar o sinal de fosforilação de S616 e valide a banda no peso molecular previsto de 82 kDa no seu sistema experimental.
• Na imunoprecipitação, titule a quantidade de anticorpo e use tampões de lise otimizados para preservar o fosfo-epitopo; confirme a especificidade por meio de controles de tratamento com fosfatase.
• Para aplicações de ELISA, incluindo ensaios competitivos de peptídeos, a reatividade do anticorpo deve ser verificada comparando o peptídeo fosforilado com o não fosforilado para garantir a fosfo-especificidade.

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