Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-eIF4EBP1 (S65) para WB, ELISA - Q13541

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do eIF4EBP1

• O eIF4EBP1 (proteína de ligação 1 ao fator de iniciação de tradução eucariótica 4E), também conhecido como PHAS-I, atua como um repressor chave da iniciação da tradução dependente de cap, ligando-se ao fator de iniciação eucariótico 4E (eIF4E).
• Em seu estado hipofosforilado, o eIF4EBP1 compete com o eIF4G (eIF4G1 e eIF4G3) pela ligação ao eIF4E, impedindo assim a montagem do complexo eIF4F e inibindo a iniciação da tradução.
• A hiperfosforilação do eIF4EBP1, frequentemente mediada pela via mTORC1, induz sua dissociação do eIF4E, permitindo a formação do complexo eIF4F e a ativação translacional.
• O eIF4EBP1 integra sinais de hormônios, fatores de crescimento e nutrientes através das vias de sinalização MAP quinase e mTOR para controlar a síntese proteica e o crescimento celular.
• É uma fosfoproteína com múltiplos sítios de fosforilação, incluindo Ser65, que modulam sua afinidade pelo eIF4E e sua capacidade de regular a tradução.
• Subcelularmente, o eIF4EBP1 localiza-se tanto no citoplasma quanto no núcleo, consistente com seus papéis no controle translacional e possivelmente no transporte núcleo-citoplasmático.
• A proteína é modificada pós-traducionalmente por acetilação e conjugação semelhante à ubiquitina (Ubl), além da fosforilação, destacando mecanismos regulatórios complexos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como este anticorpo tem como alvo um sítio de fosforilação específico (Ser65), confirme a especificidade da detecção tratando lisados celulares com fosfatase lambda ou comparando sinais de mutantes do tipo selvagem versus deficientes em fosforilação.
• Para Western blot, use procedimentos padrão, mas certifique-se de que os tampões de lise contenham inibidores de fosfatase para preservar os estados de fosforilação. Um agente bloqueador como BSA pode ajudar a reduzir a ligação inespecífica típica de anticorpos fosfo-específicos.
• No ELISA, considere revestir com o peptídeo imunogênico como controle positivo e incluir um peptídeo não fosforilado para verificar a especificidade fosfo.
• A ativação do mTORC1 (por exemplo, por estimulação com insulina ou soro) aumenta a fosforilação da Ser65, enquanto a inibição (por exemplo, rapamicina) a diminui; inclua controles estimulatórios ou inibitórios apropriados em seus experimentos.

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