mAb de Coelho contra Phospho-eIF4EBP1-T37/T46 para WB e ELISA - Q13541

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (Proteína de ligação ao fator de iniciação da tradução eucariótica 4E 1), também conhecida como PHAS-I, é um repressor chave da iniciação da tradução.
• Ela regula a atividade de EIF4E competindo com EIF4G1/EIF4G3 pela ligação a EIF4E. Em seu estado hipofosforilado, ela se liga fortemente a EIF4E e inibe a tradução dependente de capso. A hiperfosforilação, em resposta a sinais de crescimento, causa a dissociação de EIF4E, permitindo a montagem do complexo eIF4F e a iniciação da tradução.
• Atua como efetor a jusante das vias mTORC1 e MAP quinase, mediando a síntese proteica em resposta a hormônios, fatores de crescimento e nutrientes.
• Se localiza tanto no citoplasma quanto no núcleo, consistente com seu papel na modulação da tradução e possivelmente em funções nucleares.
• Sofre extensas modificações pós-traducionais incluindo fosforilação (por exemplo, em T37, T46, T70, S65), acetilação e ubiquitinação (registrada como ligação isopeptídica e conjugação Ubl), que regulam coletivamente sua atividade e estabilidade.
• Peso molecular de aproximadamente 13 kDa (12580 Da) determinado por sequência, embora a migração em SDS-PAGE possa variar devido aos estados de fosforilação.
• Classificada como inibidor de síntese proteica, fosfoproteína e pertence à família de regulação da tradução; também é identificada em estudos de proteômica como componente do proteoma de referência.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo reconhece níveis endógenos de eIF4EBP1 apenas quando ela está fosforilada em Thr37 e Thr46.
• Para Western blot, inclua inibidores de fosfatase nos tampões de lise para preservar os sinais de fosforilação. A banda principal geralmente migra em torno de 13-20 kDa; múltiplas bandas podem aparecer devido a fosforilação diferencial.
• Valide o sinal fosfo-específico tratando as células com estímulos (por exemplo, insulina, soro) para induzir a fosforilação, e opcionalmente use tratamento com fosfatase ou competição com peptídeo não fosforilado.
• Para ELISA, otimize as condições de recobrimento e a concentração do anticorpo; considere o pareamento com um anticorpo anti-eIF4EBP1 total para normalização.
• A reatividade cruzada foi demonstrada em humano e rato; para camundongo, apesar da homologia de sequência, a reatividade não está listada nos dados de reatividade cruzada; pode ser necessária a validação em amostras de camundongo.

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