Fosfo-eIF4EBP1-T45 pAb de Coelho para Western Blot - Q13541

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do eIF4EBP1

• A proteína de ligação ao fator 4E de iniciação de tradução eucariótica 1 (eIF4EBP1, também conhecida como PHAS-I) é um repressor chave da iniciação de tradução dependente da capa 5'. Pertence à família de proteínas de ligação ao eIF4E e compete com o eIF4G pela ligação ao eIF4E, impedindo assim a montagem do complexo eIF4F.
• A atividade repressora do eIF4EBP1 é regulada pelo seu estado de fosforilação: o eIF4EBP1 hipofosforilado liga-se fortemente ao eIF4E e inibe a tradução, enquanto a hiperfosforilação (por exemplo, em Thr45 e outros locais) dissocia-o do eIF4E, permitindo a formação do eIF4F e a iniciação da tradução.
• O eIF4EBP1 medeia a regulação da síntese proteica a jusante de vários estímulos, incluindo hormonas, fatores de crescimento e nutrientes, através das vias de sinalização da quinase MAP e mTORC1. A fosforilação em Thr45 é um evento crítico inicial na cascata de fosforilação sequencial de múltiplos locais.
• A localização subcelular é predominantemente citoplasmática, mas o eIF4EBP1 também pode translocar para o núcleo, onde pode ter funções regulatórias adicionais.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, ubiquitinação (formação de ligação isopeptídica) e extensa fosforilação em múltiplos resíduos. O peso molecular calculado da proteína não modificada é de aproximadamente 12,5 kDa, com migração em SDS-PAGE frequentemente observada em torno de 13–15 kDa, dependendo do estado de fosforilação.
• O eIF4EBP1 é amplamente expresso e desempenha um papel central no controlo do crescimento celular, proliferação e sobrevivência. A desregulação da sua fosforilação está implicada no cancro e em distúrbios metabólicos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio utilizado é um peptídeo fosfo sintético que abrange o Thr45, indicando que este anticorpo foi concebido para reconhecer especificamente a forma fosforilada em Thr45 do eIF4EBP1. A reatividade cruzada com eIF4EBP1 não fosforilado ou outros membros da família é improvável, mas deve ser avaliada em modelos biológicos relevantes.
• Para Western blot, certifique-se de que os lisados proteicos são preparados na presença de inibidores de fosfatases para preservar o estado de fosforilação. É esperada uma banda em aproximadamente 13–15 kDa para o eIF4EBP1 humano; o peso molecular aparente pode deslocar-se ligeiramente dependendo dos níveis globais de fosforilação.
• Inclua controlos apropriados para validar a especificidade do anticorpo, tais como lisados não tratados versus lisados tratados com fosfatase, ou lisados de células com atividade mTORC1 modulada (por exemplo, privação de serum/estimulação com insulina).
• O desempenho deste anticorpo noutras aplicações (por exemplo, IHC, IF, IP) não foi descrito; recomenda-se testes preliminares se for utilizado fora de WB.

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