Phospho-EPHA2-Y594 pAb de coelho para WB e ELISA - P29317

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da EPHA2

• O gene EPHA2 codifica o receptor efrina tipo A 2, uma receptor tirosina quinase que transduz sinais após se ligar a ligandos efrina-A ligados à membrana de células adjacentes, iniciando a sinalização bidirecional (para frente através do receptor e reversa através do ligante).
• Regula diversos processos celulares, incluindo migração celular, adesão mediada por integrina, proliferação e diferenciação, em parte através da modulação da via de sinalização ERK1/ERK2.
• A EPHA2 participa de processos de desenvolvimento como angiogênese, padronização do rombencéfalo e morfogênese ramificada na glândula mamária, além de contribuir para a organização e transparência das fibras do cristalino.
• Além da fisiologia normal, a EPHA2 atua como receptor do vírus da hepatite C (HCV) e do citomegalovírus humano (HCMV), mediando a entrada viral nas células hospedeiras.
• A proteína é localizada na membrana celular, com enriquecimento em protrusões celulares dinâmicas, incluindo membranas de ruffles, lamelipódios e adesões focais, o que é consistente com seu papel na adesão e motilidade celular.
• A EPHA2 é altamente expressa em tecidos ricos em epitélio, como pele, intestino, pulmão e ovário, também sendo detectada em linhagens celulares de cérebro e glioma.
• As principais características estruturais incluem um domínio extracelular de ligação a efrina, um único domínio transmembranar e um domínio quinase intracelular com o resíduo de tirosina fosforilável Y594.
• A EPHA2 é classificada sob várias palavras-chave funcionais: tirosina-proteína quinase, ligação a ATP, receptor, glicoproteína, splicing alternativo e angiogênese, destacando seu papel central na transdução de sinais e na doença.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético que inclui a Y594, o que deve fornecer alta especificidade para a forma fosforilada — confirme a especificidade tratando as amostras com λ-fosfatase antes do western blot.
• Para western blotting, inclua inibidores de fosfatase durante a lise e considere usar controles positivos, como células estimuladas por efrina-A1 ou linhagens de câncer epitelial conhecidas por superexpressar EPHA2.
• Devido à reatividade cruzada relatada com rato, este anticorpo pode ser adequado para estudos em modelos de rato; no entanto, valide a reatividade e a diluição ideal no seu sistema de amostra específico.
• No ELISA, use um formato direto ou indireto com antígeno de captura de EPHA2 fosforilada; as condições do ensaio devem ser otimizadas empiricamente para a concentração de revestimento e a diluição do anticorpo de detecção.
• Observe que o peso molecular previsto da EPHA2 é de aproximadamente 108 kDa — sempre execute marcadores de peso molecular adequados e verifique o tamanho da banda.

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