Anticorpo Policlonal de Coelho Phospho-FAK-Y397 para WB, ELISA - Q05397

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da FAK

• A quinase de adesão focal 1 (FAK, também conhecida como PTK2) é uma proteína-tirosina quinase não receptora que desempenha um papel central na transdução de sinais mediada por integrinas, regulando a migração celular, adesão, espalhamento e reorganização do citoesqueleto.
• Codificada pelo gene PTK2, a FAK é essencial para o desenvolvimento embrionário precoce, angiogênese, função dos cardiomiócitos e desenvolvimento do sistema nervoso (crescimento axonal, migração neuronal, formação de sinapses).
• A FAK sofre autofosforilação em Tyr397 após a ativação, criando um local de ligação de alta afinidade para as quinases da família SRC; este evento é crítico para a montagem de complexos de sinalização que propagam vias a jusante, como PI3K/AKT e MAPK/ERK.
• A nível subcelular, a FAK localiza-se predominantemente às adesões focais, mas também à membrana celular, citoplasma perinuclear, córtex celular, citoesqueleto, centrossomo, corpo basal do cílio e núcleo, refletindo seus diversos papéis de sinalização.
• A isoforma 6 (FRNK) carece do domínio da quinase e funciona como um inibidor dominante negativo da sinalização da FAK, atenuando o acúmulo nuclear de LPXN e limitando a transcrição gênica dependente de SRF.
• A FAK é amplamente expressa; detetada ubiquitousamente e especialmente em células epiteliais, linfócitos B e T e fibroblastos pulmonares. Referências relacionadas: PMID:31630787
• Modificações pós-traducionais principais incluem fosforilação de tirosina (por exemplo, Y397), acetilação e ubiquitinação, que regulam sua atividade de quinase, interações proteicas e estabilidade.
• Este anticorpo reconhece especificamente a FAK fosforilada em Tyr397, permitindo que os investigadores monitorem o estado de ativação da FAK em estudos de sinalização.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético em torno de Tyr397; espera-se que o anticorpo reconheça especificamente a forma fosforilada. Valide a especificidade tratando lisados com fosfatase ou usando bloqueio com peptídeo não fosforilado.
• Para Western blot, o peso molecular previsto é de ~119 kDa. Use controlos positivos apropriados (por exemplo, células tratadas com pervanadato para induzir a fosforilação).
• Para ELISA, considere revestir as placas com o fosfo-peptídeo e usar um anticorpo total de FAK como controlo de carga.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato é relatada, mas realize experimentos de titulação no sistema modelo relevante.
• Envio em sacos de gelo; armazene a -20°C após o recebimento para estabilidade a longo prazo.

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