pAb de Coelho contra Filamina A-Fosforilada S2152 para WB, ELISA - P21333

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Filamina-A

• A Filamina-A (FLNA) é uma das principais proteínas de ligação à actina que faz a ligação cruzada de filamentos de actina em redes ortogonais e os liga a glicoproteínas de membrana, funcionando como um scaffold para uma ampla gama de proteínas de sinalização citoplasmática.
• Ela se localiza no córtex celular, no citoesqueleto, no pericário e em projeções celulares especializadas, como cones de crescimento e podossomos, onde organiza o citoesqueleto de actina.
• A Filamina-A é essencial para a adesão celular, os contatos célula-célula e a dinâmica das junções aderentes durante o desenvolvimento de vasos sanguíneos, coração e cérebro.
• Ela é necessária para o colapso do cone de crescimento induzido por SEMA3A durante o direcionamento do axônio, ligando a sinalização da semaforina à remodelação da actina. Referências relacionadas: PMID:25358863
• A Filamina-A é expressa de forma ubíqua e tem um peso molecular de ~281 kDa; múltiplas isoformas surgem a partir de splicing alternativo, embora este produto tenha como alvo um sítio de fosforilação conservado na sequência canônica.
• A proteína está sujeita a múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, formação de ligação isopeptídica e conjugação com ubiquitina; a fosforilação em S2152 é um evento regulado dinamicamente.
• Mutações em FLNA estão associadas a um espectro de doenças humanas, incluindo heterotopia nodular periventricular, síndromes otopalatodigitais e displasia valvar cardíaca.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Como o imunógeno é um fosfopeptídeo sintético ao redor de S2152, inclua inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra para preservar o estado de fosforilação para o Western blotting.
• Verifique a especificidade do anticorpo por competição com o peptídeo não fosforilado ou tratando as amostras com lambda fosfatase; a perda de sinal confirma a especificidade para a forma fosforilada.
• O grande tamanho da Filamina-A (281 kDa) pode exigir géis de SDS-PAGE de baixa porcentagem (ex: 6%) e tempos de transferência estendidos; considere a transferência úmida a 30 V durante a noite.
• Para ELISA, considere combinar este anticorpo específico para fosforilação com um anticorpo anti-Filamina A total para permitir a medição da razão fosforilada/total.
• A reatividade cruzada é relatada para humano, camundongo e rato; valide em seu tecido ou sistema celular específico se estiver trabalhando com outras espécies.

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