Anticorpo Monoclonal Coelho Phospho-IκBα-S36 para WB, IHC-P, ELISA - P25963

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IκBα

• IκBα (inibidor alfa do NF-kappa-B, também conhecido como MAD3 ou NFKBI) é uma proteína reguladora chave que inibe os fatores de transcrição NF-κB, retendo os dímeros RELA/p65 e NFKB1/p50 no citoplasma, mascarando seus sinais de localização nuclear. Referências relacionadas: PMID:1493333 PMID:36651806 PMID:7479976

• Após o estímulo celular por sinais imunes e pró-inflamatórios, o IκBα sofre fosforilação nos resíduos Ser32 e Ser36, o que desencadeia sua ubiquitinação e subsequente degradação proteassômica, liberando os dímeros de NF-κB para se translocarem ao núcleo e ativarem a transcrição. Referências relacionadas: PMID:7479976 PMID:7628694 PMID:7796813

• IκBα é um membro da família IκB de inibidores, caracterizada por repetições de anquirina que mediam as interações proteína-proteína com os dímeros de NF-κB.

• Subcelularmente, o IκBα trafega entre o citoplasma e o núcleo, mas sua localização predominante é citoplasmática, onde ele sequestra os complexos inativos de NF-κB.

• As modificações pós-traducionais do IκBα incluem fosforilação, ubiquitinação (conjugação Ubl), hidroxilação e formação de ligação isopeptídica, que regulam sua estabilidade e atividade.

• O gene NFKBIA está associado a displasia ectodérmica e outros distúrbios relacionados ao sistema imunológico quando mutado, destacando seu papel crítico na homeostase imunológica.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético ao redor do resíduo Ser36, garantindo alta especificidade para a forma fosforilada. O bloqueio com peptídeo não fosforilado pode ser usado para confirmar a especificidade fosfo-específica em WB.
• Para WB, considere estimular as células (por exemplo, com TNF-α ou IL-1β) para induzir a fosforilação e degradação do IκBα, que pode ser monitorada com este anticorpo.
• Em IHC-P, os protocolos de recuperação de antígeno e permeabilização devem ser otimizados; valide a coloração em secções de tecido conhecidas por expressar a via de sinalização NF-κB ativada.
• Para ELISA, use este anticorpo como reagente de captura ou detecção; a reatividade cruzada com o IκBα não fosforilado deve ser avaliada dependendo do formato do ensaio.
• Como o anticorpo reage com humano, camundongo e rato, ele é adequado para estudos translacionais entre essas espécies; sempre inclua controles positivos e negativos apropriados.

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