pAb de coelho contra Phospho-IRF3-S386 para WB e ELISA - Q14653

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IRF3

• Regulador transcrição chave das respostas imunes dependentes de interferão (IFN) de tipo I, que controla a expressão de IFN-α/β e de genes estimulados por interferão (ISGs) ao ligar-se aos promotores do elemento de resposta estimulado por interferão (ISRE).
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• Existe numa forma monomérica inativa no citoplasma de células não infectadas; após infeção viral ou sinalização por TLR, as cinases IKBKE e TBK1 fosforilam o IRF3 em resíduos chave incluindo a S386, induzindo mudança conformacional, dimerização e translocação nuclear.
  Referências relacionadas: PMID:22394562, PMID:25636800, PMID:27302953

• No núcleo, o IRF3 fosforilado associa-se a CREBBP para formar o complexo fator 1 ativado por dsRNA (DRAF1), que ativa potentemente a transcrição de genes de IFN de tipo I e ISG.
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• Desempenha um papel crítico nas fases inicial e tardia da indução do gene IFN, e pode ativar programas distintos de expressão genética em macrófagos, incluindo a capacidade de induzir apoptose significativa em macrófagos primários.
  Referências relacionadas: PMID:16846591, PMID:25609812

• Fator de transcrição chave na resposta IFN durante a infeção por SARS-CoV-2, mediando a defesa antiviral.
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• A localização subcelular alterna entre citoplasma, núcleo e mitocôndria; o recrutamento mitocondrial (via TOMM70:HSP90AA1) pode desencadear apoptose através de BAX.
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• É expresso constitutivamente numa vasta gama de tecidos; o gene sofre splicing alternativo e a proteína está sujeita a acetilação, fosforilação e conjugação do tipo ubiquitina.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um fosfopéptido sintético correspondente ao sítio de fosforilação S386; recomendamos a utilização de inibidores de fosfatase durante a lise da amostra para preservar o sinal de fosforilação.
• Para Western blot, é esperada uma banda em torno de 47 kDa; inclua um controlo de bloqueio com peptídeo não fosforilado para confirmar a fosfoespecificidade.
• Em ELISA, pode ser utilizada a cobertura direta com o fosfopéptido ou a captura do alvo a partir de lisados; a titulação do anticorpo é recomendada para obter uma relação sinal-ruído ótima.

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