Anticorpo Policlonar de Coelho Phospho-IRS1-S312 para Western Blot - P35568

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IRS1

• O substrato do receptor de insulina 1 (IRS1) é uma proteína adaptadora de sinalização crítica que medeia a transdução de sinal do receptor de insulina (INSR) e do receptor do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF1R), desempenhando papéis essenciais no desenvolvimento, crescimento, homeostase da glicose e metabolismo lipídico. Referências relacionadas: PMID:7541045, PMID:19639489
• Após fosforilação pelo receptor de insulina ativado, o IRS1 atua como uma proteína de ancoragem/estrutura, recrutando proteínas contendo domínio SH2, como a subunidade regulatória p85 da PI3K, NCK1, NCK2, GRB2 e SHP2, para propagar sinais a jusante. Referências relacionadas: PMID:11171109, PMID:8265614
• O recrutamento do complexo GRB2-SOS1 leva à ativação da cascata Ras/Raf/MEK/MAPK, enquanto a ativação da via PI3K/AKT medeia a maioria dos efeitos metabólicos da insulina; ambas as vias cooperam para regular a expressão gênica, o crescimento e a diferenciação celular.
• O IRS1 também atua como regulador positivo da via de sinalização Wnt/β-catenina ao suprimir a degradação mediada por autofagia de DVL2, promovendo assim a proliferação celular. Referências relacionadas: PMID:24616100
• O IRS1 se localiza tanto no citoplasma quanto no núcleo, o que é consistente com seus papéis na sinalização e regulação gênica.
• A proteína está sujeita a extensas modificações pós-tradução, incluindo fosforilação, ubiquitinação e S-nitrosilação, que ajustam finamente sua atividade e estabilidade; palavras-chave incluem Fosfoproteína, Conjugação Ubl e Diabetes mellitus.
• Mutações ou desregulação do IRS1 estão associadas à resistência à insulina e diabetes tipo 2, destacando sua importância nas doenças metabólicas.
• O IRS1 humano tem um peso molecular calculado de aproximadamente 131,6 kDa e migra em cerca de 132 kDa em SDS-PAGE.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosfo-específico correspondente a resíduos ao redor da serina 312 do IRS1 humano. A especificidade para a forma fosforilada deve ser confirmada; considere o uso de lisados tratados com fosfatase ou bloqueio com peptídeo não fosforilado na sua validação.
• A detecção do IRS1 por Western blot normalmente produz uma banda em torno de 132 kDa; use marcadores de peso molecular apropriados e leve em consideração o comportamento de migração conhecido da proteína.
• Para o IRS1 fosforilado, espera-se que o tratamento de células com insulina ou IGF-1 antes da lise aumente o sinal; otimize o tempo de estimulação e a concentração para o seu sistema.
• Este anticorpo apresenta reatividade cruzada com o IRS1 de camundongo e rato de acordo com dados do fornecedor; valide no sistema de amostra relevante usando controles apropriados.
• Dada a suscetibilidade dos fosfo-epitopos, evite stripping agressivo e re-probagem de membranas; se necessário, verifique se o sinal fosforilado não é perdido.

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