pAb de coelho contra Phospho-MAP2K4-T261 - P45985

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de MAP2K4

• MAP2K4 (também conhecido como MEK4, MKK4, SEK1, JNKK1, entre outros apelidos) é uma proteína quinase de dupla especificidade que atua como componente chave da cascata de sinalização de quinases ativadas por mitógenos (MAP).
• É uma quinase essencial na via da quinase ativada por estresse/quinase N-terminal de c-Jun (SAP/JNK), fosforilando e ativando diretamente as JNKs (MAPK8/JNK1, MAPK9/JNK2, MAPK10/JNK3) e também as p38 MAPKs (MAPK11, MAPK12, MAPK13, MAPK14).
• MAP2K4 fosforila preferencialmente o resíduo de tirosina dentro do motivo Thr-Pro-Tyr das JNKs, enquanto MAP2K7 atua sobre o resíduo de treonina; juntos, eles ativam sinergicamente as JNKs em resposta a diversos estímulos.
• Esta quinase é necessária para manter a homeostase linfóide periférica e está envolvida na sinalização de morte mitocondrial, incluindo a liberação de citocromo c que leva à apoptose.
• A localização subcelular inclui tanto o citoplasma quanto o núcleo, consistente com seu papel na transdução de sinal da superfície celular para o núcleo.
• MAP2K4 é amplamente expressa em todos os tecidos, com expressão particularmente abundante observada no músculo esquelético.
• A proteína sofre várias modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, metilação e fosforilação, que regulam sua atividade, e está sujeita a splicing alternativo.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Como um anticorpo fosfo-específico desenvolvido contra um peptídeo fosforilado sintético ao redor de Thr261, é fundamental incluir inibidores de fosfatase nos tampões de lise para preservar o estado de fosforilação de MAP2K4 endógena durante a preparação das amostras.
• Valide a especificidade do anticorpo tratando os lisados celulares com lambda fosfatase; a desfosforilação bem-sucedida deve eliminar o sinal se o anticorpo reconhecer estritamente a forma fosforilada de T261.
• Para western blotting, o peso molecular esperado é de aproximadamente 44 kDa; utilize porcentagens de gel e condições de transferência adequadas para essa faixa de tamanho.
• A reatividade cruzada é prevista para humano, camundongo e rato com base na homologia de sequência da região do imunógeno; no entanto, recomenda-se a verificação na espécie de interesse.
• Em aplicações de ELISA, considere utilizar este anticorpo como reagente de captura ou detecção, e otimize empiricamente as condições de recobrimento e detecção com padrões de peptídeo ou proteína fosforilados.

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