mAb de Coelho para Phospho-NF-κB p105-S932 para WB, ELISA - P19838

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de NF-κB p105

• NFKB1 codifica a proteína precursora p105, que é processada proteoliticamente para gerar a subunidade ativa p50 do complexo do fator de transcrição NF-κB (PubMed:1423592). Referências relacionadas: PMID:1423592
• A subunidade p50 se associa a RELA/p65 para formar o heterodímero p65-p50, o complexo de NF-κB mais abundante, que se liga aos sítios κB (5'-GGRNNYYCC-3') nos promotores dos genes alvo para ativar a transcrição (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Referências relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764
• NF-κB é um fator de transcrição pleiotrópico central para a resposta imune, inflamação, apoptose e proliferação celular, regulado por proteínas inibidoras IκB e diversos estímulos.
• A proteína p105 contém um domínio de homologia Rel N-terminal (RHD) e repetições de anquirina C-terminal; ela funciona como um fator de retenção citoplasmático para os dímeros de NF-κB, sequestrando-os em estado inativo.
• Após sinais de ativação, as IκB quinases (IKKs) fosforilama IκB, levando à sua degradação e liberação dos dímeros de NF-κB, que então se translocam para o núcleo para modular a expressão gênica.
• Os homodímeros p50 atuam como repressores transcricionais, a menos que se associem a BCL3, destacando a versatilidade reguladora específica do dímero de NF-κB.
• Modificações pós-tradução, incluindo fosforilação, acetilação, ubiquitinação e S-nitrosilação, ajustam finamente a atividade de NF-κB; a fosforilação em resíduos de serina (por exemplo, S932) está implicada no processamento e ativação de p105.
• A localização subcelular é predominantemente citoplasmática para p105, enquanto os dímeros ativos contendo p50 se deslocam entre o citoplasma e o núcleo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético correspondente aos resíduos ao redor de Ser932 do NF-κB p105 humano. Para Western blot, espera-se uma banda principal de aproximadamente 105 kDa (p105) e possivelmente uma banda de cerca de 50 kDa (p50). Valide a especificidade de fosforilação tratando os lisados com fosfatase ou comparando com um anticorpo não fosfo-específico.
• Para aplicações de ELISA, determine e otimize a concentração do anticorpo usando peptídeo fosforilado ou lisados de células estimuladas. Inclua etapas de bloqueio adequadas para reduzir a ligação não específica.
• Dada a reatividade cruzada do anticorpo com camundongo e rato, considere usar linhagens celulares relevantes (por exemplo, Jurkat, HeLa, RAW 264.7) como controles positivos. A indução da sinalização de NF-κB com TNF-α, LPS ou PMA/ionomicina pode melhorar a detecção.
• Sempre inclua marcadores de peso molecular e controles adequados para confirmar a especificidade, pois os membros da família NF-κB compartilham similaridade.

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