Anticorpo Monoclonal de Coelho Phospho-NF-kB p65/RelA-S536 para WB, ELISA - Q04206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Fator de Transcrição p65

• Identidade proteica e formação de complexos: O fator de transcrição p65 (RELA) é uma subunidade chave do complexo do fator de transcrição NF-kB. Ele forma homo ou heterodímeros com outras proteínas da família NF-kB/Rel; o heterodímero RELA-NFKB1 é o mais abundante e atua como ativador transcricional.
• Papéis biológicos centrais: O NF-kB regula uma ampla gama de processos biológicos, incluindo inflamação, imunidade, diferenciação celular, proliferação e apoptose. É essencial para a expressão de genes de citocinas em células T.
  Referências relacionadas: PMID:15790681
• Resposta antiviral: A RELA funciona como um fator de transcrição chave na resposta ao interferon durante a infecção por SARS-CoV-2.
  Referências relacionadas: PMID:33440148
• Localização subcelular e ativação: Em células não estimuladas, o NF-kB é sequestrado no citoplasma por proteínas inibidoras I-kB. Após a estimulação, o I-kB é fosforilado pelo IKK e degradado, liberando a RELA para se translocar para o núcleo e ativar a transcrição dos genes alvo.
• Fosforilação em Ser536: A fosforilação da RELA em Ser536 é uma modificação pós-traducional crítica que aumenta sua atividade transcricional, promove a localização nuclear e pode modular as interações com coativadores.
• Outras modificações e interações hospedeiro-patógeno: Além da fosforilação, a RELA é modificada por acetilação, metilação, ubiquitinação e S-nitrosilação, além de participar de interações entre hospedeiro e vírus.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi desenvolvido contra um fosfopéptido sintético correspondente aos resíduos ao redor de Ser536 da RELA humana; espera-se que ele reconheça especificamente a forma fosforilada da proteína.
• Para Western blotting (WB), considere estimular as células com ativadores conhecidos de NF-kB (por exemplo, TNF-α, LPS) para induzir a fosforilação de Ser536. Inclua inibidores de fosfatase nos tampões de lise para preservar o fosfoepítopo.
• Valide a especificidade do sinal fosfo comparando amostras estimuladas e não estimuladas, ou tratando os lisados com fosfatase lambda antes do WB.
• Para aplicações de ELISA, otimize as condições do ensaio para detecção de proteínas fosforiladas e considere usar um anticorpo de detecção fosfo-específico para garantir a especificidade.
• É relatado que o anticorpo tem reatividade cruzada com a RELA de camundongo e rato; confirme a reatividade com lisados adequados dessas espécies.

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