Anticorpo Policlonal de Coelho Phospho-NFKB1 (S337) para WB, ELISA - P19838

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NFKB1

• O NFKB1 codifica o precursor p105, que sofre processamento mediado por proteassoma co e pós-traducional para gerar a subunidade ativa p50. O p50 forma homodímeros ou heterodímeros com outros membros da família NF-κB (RELA, RELB, REL, NFKB2). Referências relacionadas: PMID:1423592
• O heterodímero p65-p50 é o complexo NF-κB mais abundante e atua como um ativador transcricional ao ligar-se a sítios de consenso κB (5′-GGRNNYYCC-3′) nos intensificadores de genes imunes e de resposta de fase aguda. Referências relacionadas: PMID:1740106 > PMID:7830764
• O homodímero p50-p50 funciona como um repressor transcricional, mas pode mudar para um ativador quando associado ao BCL3. O NFKB1 p105 também retém proteínas NF-κB no citoplasma, controlando assim sua translocação nuclear.
• A sinalização NF-κB é estritamente regulada por modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, S-nitrosilação e ubiquitinação. O NFKB1 é uma fosfoproteína; eventos de fosforilação modulam sua estabilidade, processamento e atividade transcricional.
• O NFKB1 é amplamente expresso, particularmente em células imunes, e desempenha um papel central na inflamação, imunidade, apoptose e proliferação celular.
• A proteína localiza-se principalmente no citoplasma em células em repouso. Após ativação e degradação dos inibidores IκB, os dímeros libertados translocam para o núcleo para induzir a expressão de genes alvo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunoógeno é um peptídeo sintético fosforilado em torno de S337 de NFKB1 humano. Para preservar o sinal de fosforilação durante o preparo da amostra, inclua inibidores de fosfatases nos tampões de lise e evite incubações prolongadas em temperaturas elevadas.
• Para Western blot, espere bandas principais em ~50 kDa (subunidade p50) e ~105 kDa (precursor p105). Devido à reatividade cruzada com ortólogos de camundongo e rato, ele pode ser usado nessas espécies, mas a diluição ideal deve ser determinada empiricamente.
• O anticorpo foi validado para WB e ELISA. Ao realizar ELISA, considere um formato sanduíche ou um desenho de ensaio competitivo, e verifique a especificidade usando controles de peptídeo não fosforilado.
• A ativação de NF-κB pode ser induzida por uma ampla gama de estímulos (por exemplo, TNF-α, LPS, IL-1β). Sempre que possível, inclua controles positivos de células estimuladas e uma amostra desfosforilada ou tratada com fosfatase para confirmar a dependência da fosforilação.

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