Phospho-NFKB1-S337 Rabbit PolymAb® para WB - P19838

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NFKB1

• O NFKB1 codifica o precursor p105, que sofre processamento mediado pelo proteassoma para gerar a subunidade p50 ativa do complexo do fator de transcrição NF-κB (PubMed:1423592). Referências relacionadas:
  PMID:1423592

• A subunidade p50 forma homodímeros ou heterodímeros com outros membros da família NF-κB/Rel, como RELA/p65, RELB e REL, ligando-se à sequência de consenso de DNA κB 5'-GGRNNYYCC-3' para regular a expressão gênica (PubMed:1740106, PubMed:7830764). Referências relacionadas:
  PMID:1740106
  PMID:7830764

• O NF-κB é um mediador central das respostas imunes e inflamatórias, crescimento celular, diferenciação e apoptose, sendo o heterodímero p65-p50 o complexo mais abundante e com atividade de transcrição.

• Os dímeros inativos de NF-κB são retidos no citoplasma por inibidores IκB; upon estímulo, o IκB é fosforilado e degradado, permitindo que o NF-κB se transloque para o núcleo e ative genes alvo.

• O NFKB1 também funciona como uma âncora de retenção citoplasmática via p105 para proteínas NF-κB associadas e, em complexo com MAP3K8, reprime a sinalização MAPK até que a degradação do p105 libere o MAP3K8 ativo.

• A proteína está sujeita a múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, ubiquitinação e hidroxilação, que modulam sua atividade, estabilidade e localização subcelular.

• A localização subcelular inclui tanto o citoplasma quanto o núcleo, refletindo seu papel duplo no sequestro de sinal e regulação transcricional.

• Issoformas alternativas produzidas por splicing alternativo contribuem para a diversidade funcional; a proteína p105 de comprimento total (105 kDa) e a subunidade processada p50 (50 kDa) são detectadas na maioria dos tipos celulares.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Dada a natureza específica para fosfo deste anticorpo, é essencial incluir inibidores de fosfatases nos tampões de lise para preservar o sinal de fosforilação durante o preparo da amostra.
• Para Western blot, recomenda-se um controle positivo com ativação conhecida da via NF-κB (por exemplo, células tratadas com TNF-α); a detecção de bandas em torno de 105 kDa (p105) e 50 kDa (p50) deve ser verificada.
• Em imuno-histoquímica, as condições de recuperação de antígeno e a diluição do anticorpo devem ser otimizadas; certifique-se de que o padrão de coloração reflita a localização nuclear/citoplasmática esperada upon ativação da via.
• O anticorpo é adequado para ELISA; considere o uso de peptídeo fosforilado como padrão para ensaios quantitativos.

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