mAb de Coelho contra Fosfo-p70 S6 Quinase 1-T421/S424 para WB, IF/ICC, ELISA - P23443

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RPS6KB1 (p70 S6 Quinase 1)

• A RPS6KB1 (p70 S6 quinase 1) é uma serina/treonina-proteína quinase que atua como um efetor chave a jusante da via de sinalização mTOR, regulando o crescimento, a proliferação e a sobrevivência celular. Referências relacionadas: PMID:11500364, PMID:12801526, PMID:14673156
• A quinase é ativada através de fosforilação em múltiplos locais, sendo que a fosforilação mediada por mTORC1 em Thr-421/Ser-424 (localizada no domínio autoinibitório) desempenha um papel crítico em sua ativação. Após estimulação mitogênica, esta fosforilação desencadeia a dissociação do complexo de iniciação da tradução EIF3 e a subsequente ativação da quinase. Referências relacionadas: PMID:16286006
• Promove a síntese proteica ao fosforilar componentes da maquinaria de tradução, incluindo EIF4B, RPS6 e EEF2K, e aumenta a iniciação da tradução ao inativar o repressor de EIF4A, PDCD4. Referências relacionadas: PMID:11500364, PMID:12801526, PMID:14673156, PMID:17053147
• A RPS6KB1 participa da regulação por feedback da sinalização mTOR ao fosforilar componentes do mTORC2, MAPKAP1/SIN1 e RICTOR, bem como o componente do mTORC1, DEPTOR, modulando assim a atividade de AKT1. Referências relacionadas: PMID:15899889, PMID:19720745, PMID:19935711, PMID:22017876
• Media a sobrevivência celular ao fosforilar e inibir a proteína pró-apoptótica BAD, e ao regular a dinâmica do complexo mitocondrial URI1-PPP1CC. Referências relacionadas: PMID:17936702
• Subcelularmente, localiza-se no citoplasma, núcleo, mitocôndrias e membrana mitocondrial externa, e compartimentos sinápticos, refletindo seus diversos papéis regulatórios.
• A proteína é amplamente expressa em tecidos humanos, sublinhando seu papel fundamental na homeostase celular.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blotting, espera-se uma banda de aproximadamente 59 kDa. Valide a especificidade usando lisados tratados com fosfatase ou competição com peptídeo não fosforilado.
• Em imunofluorescência, otimize as condições de fixação e permeabilização para preservar o fosfo-epítopo; considere testar tratamentos de privação de soro e estimulação para visualizar mudanças de localização dependentes da ativação.
• Para aplicações de ELISA, revestir com o fosfo-peptídeo alvo ou usar um formato sanduíche para capturar e detectar a fosfo-p70 S6K, garantindo que o anticorpo de detecção reconheça a fosforilação específica.
• Ao estender as aplicações para amostras de camundongo ou rato, verifique a reatividade cruzada no tecido ou linhagem celular relevante, pois a homologia de sequência pode influenciar a ligação.
• O design do imunógeno (fosfo-peptídeo sintético ao redor de T421/S424) garante a fosfo-especificidade; confirme sempre tratando as amostras com lambda fosfatase ou usando um controle de anticorpo não fosfo.

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