Anticorpo Policlonal de Coelho Phospho-p90Rsk/RSK1/RPS6KA1-T359/S363 para WB, ELISA - Q15418

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da RPS6KA1/RSK1

• Identidade da proteína: O RPS6KA1 codifica a ribossomal proteína S6 quinase alfa-1 de 90 kDa (RSK1/p90RSK), uma serina/treonina quinase da família p90RSK; o splicing alternativo gera múltiplas isoformas.
• Efetor da via ERK-MAPK: Opera a jusante do ERK1/2 para fosforilar os fatores de transcrição CREB1, ETV1/ER81, NR4A1/NUR77 e o cofator CREBBP, promovendo a expressão de genes imediatos e a mitogénese.
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• Iniciação da tradução: Melhora a tradução dependente de capa 5' fosforilando RPS6 e EIF4B em resposta à insulina ou fatores de crescimento.
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• Modulador da sinalização mTOR: Regula a atividade do mTORC1 e mTORC2 através da fosforilação de TSC2 e RPTOR, e retroalimenta via DEPTOR.
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• Efeitos antiapoptóticos: Inibe as proteínas pró-apoptóticas BAD e DAPK1 e promove a sobrevivência de células estreladas hepáticas e hepatócitos via fosforilação de CEBPB.
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• Migração celular: Fosforila EPHA2 em Ser-897 para controlar a motilidade celular.
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• Localização subcelular e regulação: Transita entre o núcleo e o citoplasma; a atividade da quinase é controlada por fosforilação em múltiplos sítios, incluindo os resíduos Thr359 e Ser363 relevantes para a ativação reconhecidos por este anticorpo.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo específico para fosfo foi produzido contra um peptídeo sintético contendo Thr359 e Ser363 fosforilados. Para Western blotting, confirme a especificidade pré-incubando o anticorpo com o peptídeo não fosforilado ou tratando as amostras com lambda fosfatase antes da transferência.
• Em WB, use tampões de bloqueio suaves ou sem fosfato (por exemplo, BSA ou leite desnatado sem inibidores de fosfatase) para preservar o reconhecimento do antigénio. Otimize empiricamente a diluição do anticorpo primário (tipicamente 1:500–1:2000) para o seu tipo de amostra e sistema de deteção.
• Para ELISA, revestir com o fosfopeptídeo ou extrato proteico e titular o anticorpo para alcançar uma razão ótima sinal-ruído. Considere usar um peptídeo não fosforilado como controlo negativo.
• Induza a fosforilação da RPS6KA1 em linhagens celulares humanas tratando com EGF (50 ng/mL) ou insulina (100 nM) por 15–30 minutos antes da lise, pois o RSK1 é fortemente ativado pela via ERK.
• A reatividade cruzada foi demonstrada para amostras humanas; para outras espécies, verifique a identidade da sequência da região do imunogénio antes do uso.

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