Anticorpo monoclonal de coelho Fosfo-PKA RIIα (PRKAR2A)-S99 para WB e ELISA - P13861

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PRKAR2A

• A PRKAR2A codifica a subunidade reguladora alfa do tipo II da proteína quinase dependente de cAMP, um componente-chave do holoenzima PKA que modula as respostas celulares ao cAMP.
• Como subunidade reguladora da PKA, liga-se ao cAMP, levando à dissociação e ativação das subunidades catalíticas, que então fosforilam alvos a jusante envolvidos no metabolismo, expressão gênica e proliferação celular.
• As subunidades reguladoras do tipo II medeiam a associação à membrana ligando-se a proteínas âncora de quinase A (AKAPs), incluindo a quinase MAP2, localizando assim a atividade da PKA em compartimentos subcelulares específicos.
• O genoma humano contém quatro tipos de subunidades reguladoras (I-alfa, I-beta, II-alfa e II-beta); a PRKAR2A pertence à classe do tipo II-alfa, e sua expressão varia entre os tecidos, sendo constitutiva em alguns e induzível em outros.
• A PRKAR2A está predominantemente localizada no citoplasma e pode associar-se à membrana celular através de interações com proteínas âncora, permitindo o controle espacial da sinalização por cAMP.
• A proteína sofre modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação em múltiplos sítios (ex.: Ser99) e acetilação, que regulam sua atividade, estabilidade ou interação com parceiros.
• O splicing alternativo gera diferentes isoformas, e a proteína é classificada sob palavras-chave como Fosfoproteína, Acetilação e ligação a cAMP, refletindo seus papéis regulatórios dinâmicos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético em torno de Ser99; considere verificar a especificidade fosfo comparando sinais entre amostras tratadas e não tratadas ou usando um controle de bloqueio com peptídeo não fosforilado.
• Para Western blotting, espera-se uma banda próxima a 46 kDa; otimize o bloqueio e a diluição do anticorpo no sistema de amostra relevante, pois a expressão endógena pode variar.
• No ELISA, use o anticorpo para detectar PRKAR2A fosforilada em lisados celulares ou de tecido; inclua controles positivos e negativos apropriados para confirmar a especificidade do ensaio.
• A reatividade cruzada é confirmada para humano e rato; se usar amostras de camundongo, valide a reatividade cruzada experimentalmente devido a possíveis diferenças de sequência.
• Devido ao papel crítico da PKA na sinalização, a fosforilação em Ser99 pode ser dinâmica; considere estimular ou inibir vias de cAMP ao projetar experimentos.

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