Fosfo-PLN-S16 pAb de Coelho para WB e ELISA - P26678

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Fosfolambana

• A Fosfolambana (PLN) é uma fosfoproteína transmembrana de 6,1 kDa que inibe reversivelmente a Ca2+-ATPase SERCA2 no retículo sarcoplasmático cardíaco, reduzindo a afinidade aparente por Ca2+ da bomba, regulando assim a contratilidade e o relaxamento cardíacos (PubMed:28890335). Referências relacionadas: PMID:28890335
• A PLN se liga preferencialmente à conformação E1 ligada ao ATP da SERCA2, que predomina em baixas concentrações diastólicas de Ca2+, e interrompe a ativação alostérica pelo ATP para retardar a recaptação de Ca2+ durante a diástole.
• Além da SERCA2, a PLN também inibe a SERCA3 e tem sido implicada na homeostase de cálcio em espermátides alongadas e no núcleo reticular do tálamo, potencialmente afetando a diferenciação de células germinativas e comportamentos de sono/vigília.
• A fosforilação da PLN na Ser16 (e Thr17) por proteínas quinases como PKA e CaMKII reverte a inibição da SERCA2, servindo como um nó regulatório crítico na sinalização β-adrenérgica e na contratilidade cardíaca.
• Subcelularmente, a PLN reside na membrana do retículo sarcoplasmático/endoplasmático e na membrana mitocondrial, ancorando suas funções reguladoras em organelas de manejo de cálcio.
• A PLN é expressa predominantemente no músculo cardíaco; mutações na PLN causam cardiomiopatias hereditárias, incluindo cardiomiopatia dilatada (CMD1P) e cardiomiopatia hipertrófica (CMH18).
• A proteína sofre múltiplas modificações covalentes — palmitoilagem, acetilação e fosforilação — que influenciam seu estado oligomérico, ancoragem na membrana e atividade reguladora.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético correspondente aos resíduos em torno da Ser16 da PLN humana; este design enriquece anticorpos que reconhecem o epítopo fosforilado. Para ELISA e Western blot, considere usar peptídeo não fosforilado ou lisatos tratados com fosfatase como controles negativos para confirmar a especificidade da fosforilação.
• Devido ao baixo peso molecular da PLN (~6 kDa), as condições padrão de SDS-PAGE podem não resolver a proteína com eficiência; géis de alta porcentagem (por exemplo, 15–20%) ou Tricine-SDS-PAGE são recomendados para detecção por Western blot.
• O anticorpo apresenta reatividade cruzada com a PLN de camundongo e rato, conforme indicado; valide a detecção da PLN fosforilada endógena em lisatos de tecido cardíaco dessas espécies, pois a PLN é altamente expressa no coração.
• Para ELISA, a natureza policlonal de coelho pode fornecer captura/detecção sensível; no entanto, a consistência entre lotes deve ser verificada para ensaios quantitativos.
• Como a fosforilação da PLN é regulada dinamicamente, a preparação apropriada da amostra com inibidores de fosfatase é essencial para preservar o sinal de fosfo-S16.

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