Phospho-POLR2A CTD-S2 Rabbit mAb - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de POLR2A

• POLR2A codifica a maior subunidade da RNA polimerase II, que catalisa a transcrição de precursores de mRNA e muitos RNAs não codificantes.
• Forma o centro ativo com POLR2B, coordenando íons Mg2+ para a adição de nucleotídeos e a correção de erros por meio da atividade exonucleásica 3'->5'. Referências relacionadas: PMID:30190596 PMID:8381534
• Contém um domínio C-terminal (CTD) único com 52 repetições de heptapeptídeos (YSPTSPS) que serve como plataforma para fatores que regulam a iniciação, alongamento e terminação da transcrição.
• A fosforilação do CTD na Ser5 promove a fuga do promotor, enquanto a fosforilação na Ser2 é necessária para a liberação da pausa e o processamento do pré-mRNA. Referências relacionadas: PMID:26124092
• A acetilação e metilação das lisinas do CTD regulam a expressão gênica, com a metilação tendo um efeito repressor.
• Apresenta atividade de RNA polimerase dependente de RNA, estendendo RNAs não codificantes na extremidade 3'.
• A localização subcelular inclui núcleo, citoplasma e cromossomo.
• Palavras-chave relevantes: fosfoproteína, acetilação, metilação, RNA polimerase dirigida por DNA, transcrição, hidrolase.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo fosfoespecífico reconhece POLR2A somente quando a Ser2 na repetição do CTD está fosforilada. Inclua inibidores de fosfatase nos tampões de lise e lavagem para preservar o sinal de fosforilação.
• Para imunoprecipitação de cromatina (ChIP) e CUT&Tag, considere fazer a titulação do anticorpo e otimizar as condições de reticulação/sonicação para os seus loci alvo específicos.
• O anticorpo é adequado para Western blot (217 kDa), imunofluorescência e imuno-histoquímica; valide no sistema de amostra relevante usando controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, células não tratadas vs. células tratadas com inibidor de quinase).
• Devido ao alto peso molecular, use um gel de SDS-PAGE de baixa porcentagem ou tempos de transferência estendidos para WB.

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