pAb de coelho Phospho-POLR2A CTD- S2/S5 - P24928

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de POLR2A

• A subunidade RPB1 da RNA polimerase II dirigida por DNA é o componente do núcleo catalítico da RNA polimerase II (Pol II), responsável pela síntese de precursores de mRNA e muitos RNAs não codificantes funcionais. Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• O ciclo de transcrição da Pol II passa pelas etapas de iniciação, alongamento e terminação, com a enzima formando o centro ativo junto com a segunda maior subunidade POLR2B/RPB2. Referências relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• POLR2A adiciona nucleotídeos por meio de um mecanismo dependente de Mg(2+) e possui atividade de provareading de exonuclease 3' -> 5' para corrigir ribonucleotídeos incorporados incorretamente. Referências relacionadas: PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• O domínio C-terminal (CTD) exclusivo, composto por 52 repetições de heptapeptídeos, funciona como uma plataforma para a regulação da transcrição; a fosforilação em Ser5 medeia a fuga do promotor, enquanto a fosforilação em Ser2 é necessária para a liberação da pausa e o processamento do pré-mRNA. Referências relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• A metilação e acetilação do CTD também regulam a expressão gênica: a acetilação está ligada à indução de genes imediatos precoces, enquanto a metilação reprime a expressão de genes alvo.
• A localização subcelular inclui núcleo, citoplasma e cromossomo, o que é consistente com seus papéis na transcrição e processamento de RNA.
• POLR2A também funciona como RNA-dependent RNA polymerase, estendendo RNAs não codificantes e atuando como replicase para o vírus da hepatite delta.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético projetado ao redor dos sítios de fosforilação S2/S5 da repetição YSPTSPS do CTD de POLR2A, o que indica que o anticorpo pode reconhecer tanto Ser2 quanto Ser5 fosforilados.
• Para Western blot, devido ao grande peso molecular (~217 kDa), considere usar géis de SDS-PAGE de baixa porcentagem (por exemplo, 6-8%) e tempos de transferência estendidos; recomendamos a inclusão de inibidores de fosfatase no tampão de lise para manter a fosforilação.
• A especificidade pode ser avaliada tratando as amostras com fosfatase lambda ou por meio de ensaios de competição com peptídeos.
• No ELISA, use placas revestidas com peptídeo fosforilado e confirme a reatividade com controles de peptídeo não fosforilado para avaliar a seletividade por fosfato.
• Este anticorpo é indicado para amostras humanas; a reatividade cruzada com outras espécies não foi relatada, por isso recomendamos a validação no sistema de amostras relevante.

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